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關(guān)鍵詞：糖化血紅蛋白；糖化白蛋白；糖基化差距
糖尿病（diabetes mellitus，DM）是一個(gè)慢性的全身性代謝性疾病，是由遺傳因素、免疫功能紊亂、微生物感染等各種致病因子作用于機(jī)體導(dǎo)致胰島功能減退、胰島素抵抗等而引發(fā)的糖、蛋白質(zhì)、脂肪、水和電解質(zhì)等一系列代謝紊亂綜合征，臨床上以高血糖為主要特點(diǎn)，典型病例可出現(xiàn)多尿、多飲、多食、消瘦等表現(xiàn)，即"三多一少"癥狀，DM一旦控制不好會(huì)引發(fā)并發(fā)癥，導(dǎo)致腎、眼、足等部位的衰竭病變，且不易治愈[[i]]。DM治療關(guān)鍵是血糖水平的控制與穩(wěn)定，臨床監(jiān)測(cè)的實(shí)驗(yàn)方法學(xué)一般包括血/尿葡萄糖試驗(yàn)、糖耐量試驗(yàn)、糖化蛋白試驗(yàn)等[[ii]-[iii]]。其中血/尿葡萄糖試驗(yàn)和糖耐量試驗(yàn)已被普遍采用，而糖化蛋白試驗(yàn)可為較長(zhǎng)時(shí)間段的血糖濃度提供回故性評(píng)估，而不受短期血糖濃度波動(dòng)的影響，因此越來(lái)越受到臨床重視[2-3]。
1、糖化蛋白的概念
糖化蛋白是指血液中已糖通過(guò)非酶促作用，將糖基加到蛋白質(zhì)的氨基酸基團(tuán)上形成的不可逆糖蛋白結(jié)合物。葡萄糖與蛋白質(zhì)首先形成一種不穩(wěn)定的葡基胺（Glycosylamine）或者Schiff堿基（Schiff Base），后者再經(jīng)不可逆的葡糖胺（Amadori）重排反應(yīng)形成穩(wěn)定的氨基酮（酮胺）[[iv]]。其反應(yīng)順序如圖1所示。血液中酮胺的含量與血漿中葡萄糖的水平是成比例的[4]。
體內(nèi)各種蛋白質(zhì)均有可能被糖基化而改變其功能，細(xì)胞外的血紅蛋白（hemoglobin， Hb）最易糖基化，除了Hb，葡萄糖也可通過(guò)非酶促糖基化反應(yīng)與其他蛋白（如清蛋白，膜蛋白，晶狀體）結(jié)合形成酮胺[[v]]。
2、酶法糖化白蛋白的概念
酶法使用蛋白酶將血清蛋白消化成低分子量的糖化蛋白片段（glycated protein fragments，GPF），隨后使用果糖氨基酸氧化酶催化產(chǎn)物GPF發(fā)生氧化反應(yīng)生成氨基酸，葡萄糖醛酮和H2O2。釋放的H2O2通過(guò)終點(diǎn)反應(yīng)比色法來(lái)測(cè)定，其吸收值與GSP的濃度成比例[[vi],[vii]]。該法檢測(cè)方便，可靠，易于自動(dòng)化，且不受內(nèi)源性還原物質(zhì)干擾，適于臨床大規(guī)模推廣應(yīng)用，但其檢測(cè)易受球蛋白成分、蛋白質(zhì)濃度影響，并且糖化氨基酸輸液會(huì)對(duì)其產(chǎn)生干擾。
酶法GA測(cè)定的是白蛋白被糖化的部分，其原理與酶法GSP類似，不同之處在于其通過(guò)偶聯(lián)對(duì)GA特異的果糖氨基酸氧化酶來(lái)實(shí)現(xiàn)其高特異性。由于其高特異性的對(duì)GA進(jìn)行測(cè)定，通過(guò)同時(shí)測(cè)定樣本中總白蛋白的含量，可以獲得GA占白蛋白的百分率，與mmol/L相比，雖然這種表達(dá)方式的益處或優(yōu)勢(shì)仍存在爭(zhēng)議，但是當(dāng)用HbA1c%作類比，GA%顯然能更容易被理解。新近研究證實(shí)，就糖尿病患者的血糖控制而言，GA%比HbA1c%能更好地預(yù)測(cè)患者死亡和住院治療的風(fēng)險(xiǎn)[[viii]]。GA酶法試驗(yàn)不受球蛋白成分、蛋白質(zhì)濃度，糖化氨基酸輸液及內(nèi)源性還原物質(zhì)干擾，能準(zhǔn)確測(cè)定人血清或血漿中GA含量[23,24]。該法試劑盒可在多數(shù)自動(dòng)生化分析儀上運(yùn)行使用，還具備良好的精密度、準(zhǔn)確度、線性以及穩(wěn)定性。目前采用的液體穩(wěn)定試劑與先前測(cè)定GA的第一代凍干粉末試劑相比，使用更方便，但穩(wěn)定性兩者可以媲美。
3、糖化蛋白臨床應(yīng)用
3.1、 HbA1c和GA的臨床應(yīng)用
DM是一組病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明的內(nèi)分泌代謝疾病，以高血糖為其主要標(biāo)志。國(guó)內(nèi)目前對(duì)DM診斷及病情檢測(cè)主要是依靠血糖濃度測(cè)定[1]。由于血糖含量易受飲食、藥物等影響，不能客觀反映人體內(nèi)血糖真正水平并且一天中體內(nèi)血糖的變化很大，因此血糖檢測(cè)不能用于反映一段時(shí)間內(nèi)血糖控制的程度，而糖化蛋白不受短期血糖濃度波動(dòng)的影響，可為較長(zhǎng)時(shí)間段的血糖濃度提供回故性評(píng)估，因此作為糖尿病監(jiān)測(cè)和血糖控制效果評(píng)估的理想生化指標(biāo)已越來(lái)越受到臨床的重視[2,3]。
臨床上，HbA1c可作為DM患者血糖控制的一個(gè)"金標(biāo)準(zhǔn)"，其濃度與紅細(xì)胞壽命（平均120天）和該時(shí)期內(nèi)血糖的平均濃度有關(guān)，反映的是過(guò)去8～l2周的平均血糖水平。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，臨床醫(yī)師可以采用飲食控制或有效藥物等方法來(lái)制定治療方案[3,6]。對(duì)妊娠期糖尿病，HbA1c在判斷是否致畸、死胎和子癇前期更有意義，故其是妊娠期糖尿病控制的重要參數(shù)[[ix],[x]]。在兒童糖尿病中，存在糖尿病典型癥狀但隨機(jī)血糖<11.1 mmol／L的疑似患者中建議檢測(cè)HbA1c[[xi]]。
相對(duì)而言，血糖與GA的結(jié)合比Hb容易且快速，由于白蛋白的半衰期為17~19 d，所以GA值反映的是糖尿病患者測(cè)定前2~3周平均血糖濃度 [2,3]，因此在糖尿病患者降糖治療過(guò)程中，GA濃度的變化早于HbA1c的改變，故對(duì)于糖尿病患者治療方案調(diào)整后療效的評(píng)價(jià)，GA比HbA1c更具有臨床參考價(jià)值，適合于觀察血糖短期、中期變化情況[34,[xii]]。與HbA1c相比，其更新不受Hb變異和紅細(xì)胞更新率的影響，能在血糖變化最顯著時(shí)更確切和及時(shí)地反映血糖水平，尤其適用于血糖波動(dòng)較大的新診斷患者降糖治療時(shí)的療效觀察。在一些特殊情況下，如透析性的貧血、急性全身性疾病期、肝病、糖尿病合并妊娠、降糖藥物調(diào)整期等，GA更能準(zhǔn)確反映短期內(nèi)的平均血糖變化[34,39]。此外，GA檢測(cè)可鑒別糖代謝紊亂是糖尿病并應(yīng)激還是單純應(yīng)激狀態(tài)，這對(duì)于臨床醫(yī)生判斷病情、指導(dǎo)治療及監(jiān)測(cè)病情有重大的臨床意義，在測(cè)定血糖的同時(shí)測(cè)定GA能更有助于客觀、準(zhǔn)確、可靠地評(píng)估糖代謝狀態(tài)[34,39]。
3.2、糖基化差距（Glycation Gap，GG）
作為糖尿病診斷和血糖監(jiān)控的"金標(biāo)準(zhǔn)"，HbA1c是檢測(cè)數(shù)周乃至數(shù)月平均血糖水平的一項(xiàng)有力指標(biāo)，但其準(zhǔn)確性受許多因素影響。對(duì)一部分糖尿病患者來(lái)說(shuō)，HbA1c水平并不能準(zhǔn)確地反應(yīng)出他們的平均血糖水平及糖尿病并發(fā)癥[[xiii],[xiv]]。研究發(fā)現(xiàn)，因基因、年齡等一些非糖類作用因素的影響，個(gè)體間的HbA1c存在相當(dāng)大的差異，如美國(guó)墨西哥人和黑人的平均HbA1c值要高于白人[25,26]，此外，HbA1c值隨著年齡的增長(zhǎng)而增加[25,26]。在DCCT試驗(yàn)中，HbA1c之間的差異并非因其平均血糖水平不同而引起的占33%，在糖尿病患者中HbA1c差異有21%不能由平均血糖含量來(lái)做出相應(yīng)的解釋[[xv]]。
由于HbA1c在紅細(xì)胞內(nèi)的合成進(jìn)程是緩慢連續(xù)進(jìn)行的，任何使紅細(xì)胞壽命縮短的情況都會(huì)導(dǎo)致HbA1c形成的時(shí)間也相應(yīng)縮短，致使檢測(cè)結(jié)果也受到影響[25]，如HbAlc的變異體及衍生物（如遺傳性變異產(chǎn)生的糖化血紅蛋白S、糖化血紅蛋白C、腎功能不全患者體內(nèi)形成的氨基乙�；�Hb、大量服用阿司匹林患者體內(nèi)形成的乙�；�Hb等），紅細(xì)胞生存周期縮短（如大量失血或溶血性貧血的患者）以及其他因素（如攝入維生素E、維生素C、缺鐵性貧血等）[25]。
為了解決GHb與平均血糖間的差異，McCarter[[xvi],[xvii],[xviii]]等提出了血紅蛋白糖化指數(shù)（hemoglobin glycation index，HGI）的概念，HGI為HbA1c實(shí)際測(cè)得的值與通過(guò)平均血糖值預(yù)測(cè)得到的值之間的差異，根據(jù)對(duì)DCCT數(shù)據(jù)庫(kù)的分析，McCarter等發(fā)現(xiàn)HGI與發(fā)生糖尿病視網(wǎng)膜病變及腎病并發(fā)癥的危險(xiǎn)有關(guān)，通過(guò)綜合考慮HbA1c和HGI這兩項(xiàng)因素，可以預(yù)測(cè)某一特定糖尿病個(gè)體的微血管并發(fā)癥危險(xiǎn)[[xix],[xx]]。
由于準(zhǔn)確測(cè)量平均血糖值存在一定困難，Robert Cohen[[xxi]]提出了替代方案，即GG評(píng)價(jià)，它被定義為HbA1c實(shí)際測(cè)得的值與通過(guò)GA值預(yù)測(cè)得到的值之間的差異。通過(guò)對(duì)1型和2型糖尿病患者的研究發(fā)現(xiàn)，GG能有效地預(yù)測(cè)糖尿病腎病的發(fā)展甚至是在對(duì)HbA1c進(jìn)行校準(zhǔn)之后，同時(shí)GG與GA之間也保持著獨(dú)立的關(guān)系[[xxii]]。Rodriguez-Segade在其最新的研究中總結(jié)道，GG和GA分別是糖化水平非糖及有糖參與決定因素的評(píng)價(jià)指標(biāo)，聯(lián)合運(yùn)用GG和GA來(lái)評(píng)價(jià)糖基化水平可以提高對(duì)糖尿病腎病風(fēng)險(xiǎn)性及血糖控制的評(píng)估[[xxiii]]。研究發(fā)現(xiàn)，中、高GG組患腎病的風(fēng)險(xiǎn)分別是低GG組的1.6和2.5倍[35]。因GG同時(shí)涉及到HbA1c及GA信息，一些研究證實(shí)比起單獨(dú)檢測(cè)HbA1c，GG能更加可靠地預(yù)測(cè)糖尿病并發(fā)癥包括腎病和視網(wǎng)膜病，因而提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確性[38]。
為了更好地對(duì)糖尿病及血糖控制情況進(jìn)行監(jiān)測(cè)，GA已成為一項(xiàng)必不可少的檢測(cè)項(xiàng)目，其研究正獲得臨床極大的支持[[xxiv],[xxv]]。GA并不是HbA1c檢測(cè)的替代品，但卻是HbA1c的補(bǔ)充，兩者的共同檢測(cè)可提高糖尿病的診斷和血糖水平的監(jiān)測(cè)，尤其對(duì)于那些HbA1c水平不能真實(shí)反應(yīng)平均血糖水平或存在GG的糖尿病患者。
4、關(guān)于糖化白蛋白GA酶法檢測(cè)試劑盒（About GA Test Kit）
預(yù)期用途（Intended Use）：
GA酶法試劑與校準(zhǔn)品應(yīng)用于血清樣品中糖化白蛋白（GA）的定量測(cè)定，而GA的測(cè)定有利于監(jiān)測(cè)糖尿病患者的病況。本試劑僅應(yīng)用于體外診斷試驗(yàn)。
糖化白蛋白GA酶法檢測(cè)試劑盒檢測(cè)原理（Assay Principle of GA）
酶法試驗(yàn)檢測(cè)糖化白蛋白（GA），首先用蛋白酶K將血清蛋白消化成低分子量的糖化蛋白片段（glycated protein fragments，GPF），隨后使用果糖纈氨酸氧化酶（fructosaminaseTM），即微生物源的amadoriase酶催化Amadori產(chǎn)物GPF發(fā)生氧化反應(yīng)生成PF（或氨基酸），葡萄糖醛酮和H2O2。釋放的H2O2通過(guò)終點(diǎn)反應(yīng)比色法來(lái)測(cè)定，其在600nm處的吸收值與GA的濃度成比例。
產(chǎn)品特性（Product Features）：
簡(jiǎn)便（Convenient）：
·獨(dú)特的穩(wěn)定液體雙試劑
性能（Performance）：
·比NBT法測(cè)定果糖胺具備更好的特異性和準(zhǔn)確性
·線性范圍：21-1354umol/L
·批間和批內(nèi)CV：＜1.3%
·靈敏度：13.0umol/L
·良好的相關(guān)系數(shù)：r2＞0.99
·干擾物質(zhì)（＜10%變化）：
抗壞血酸 5mg/dl
膽紅素 7.5 mg/dl
結(jié)合膽紅素 5 mg/dl
葡萄糖 2400 mg/dl
血紅蛋白 200 mg/dl
尿酸 35 mg/dl
甘油三酯 2000 mg/dl
穩(wěn)定性（Stability）
·2-8℃儲(chǔ)存12個(gè)月
適用性（Flexibility）
·血清或血漿
GA測(cè)試在文獻(xiàn)記載中被應(yīng)用于（ GA test used in literatures for）
·糖尿病的監(jiān)測(cè)及控制，尤其是有以下情況的患者：
·妊娠糖尿病
·溶血性貧血或失血
·血液透析或腹膜透析
·GG的測(cè)定
·快速鑒定食物或藥物調(diào)理治療的效果
·是應(yīng)用糖化血紅蛋白診斷及篩選糖尿病的補(bǔ)充，兩種方法的同時(shí)使用將提供更確鑿更精確的結(jié)果
參考范圍（Reference Range）
糖化白蛋白值：11～16%，此數(shù)據(jù)來(lái)源于120位健康人的檢測(cè)結(jié)果，并參考相關(guān)文獻(xiàn)，僅供參考。建議各實(shí)驗(yàn)室建立自己的參考值范圍。
參考文獻(xiàn)：中華內(nèi)科雜志2009年6月第48卷第6期《糖化血清白蛋白正常參考值的多中心臨床研究》 。
糖化白蛋白值升高見(jiàn)于糖尿病。成人（20-60歲）報(bào)道的正常范圍在100-285umol/L之間。建議各實(shí)驗(yàn)室建立自己的參考范圍來(lái)反應(yīng)不同年齡、性別、飲食習(xí)慣和居住環(huán)境的人群。
試劑盒配置和訂購(gòu)信息（Kit Configuration and Ordering Information）
寧波美康生物科技有限公司糖化白蛋白試劑（GA）包裝規(guī)格，其配置參數(shù)如下：
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配置 Configuration
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試劑規(guī)格kit size
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標(biāo)準(zhǔn)品
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質(zhì)控品
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通用型（Universal）
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GA
R1:2×40mL
R2:2×10mL
ALB
R3:3×40mL
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2×1mL
（標(biāo)配）
|
2×1mL
（可選購(gòu)）
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貝克曼（Beckman）
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GA
R1:1×80mL
R2:1×20mL
ALB
R3:1×120mL
|
2×1mL
（標(biāo)配）
|
2×1mL
（可選購(gòu)）
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德靈（Dade）
|
6×60T
|
2×1mL
（標(biāo)配）
|
2×1mL
（可選購(gòu)）
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