亚洲精品久久无码2021,偷拍亚洲另类无码专区制服,亚洲欧美性都花花世界,国产熟女的精品视频大全,色偷偷2025免费视频观看,撅着大腚SXMV色香视频

近年來，感染性疾病的新發(fā)突發(fā)不斷威脅人類健康，新型冠狀病毒肺炎、中東呼吸綜合征、流感、埃博拉、寨卡病毒、黃熱病、裂谷熱等傳染性疾病的傳播，成為全球公共衛(wèi)生問題。隨著城市化的發(fā)展、全球貿(mào)易往來的增加，環(huán)境改變加劇自然疫源性傳染病的傳播風險，感染性疾病的預(yù)防控制刻不容緩。因此，開展傳染病的即時快速檢測，對于感染性疾病的防控工作具有重大意義。

1995年美國CLSI提出即時檢測（point-of-care testing，POCT）的概念，1995年美國臨床化學(xué)學(xué)會（American Association for Clinical Chemistry，AACC）年會展覽展出了一些能夠快捷移動、操作簡便、結(jié)果準確可靠的技術(shù)和設(shè)備，即"在靠近患者的地方在極短的時間內(nèi)以混合型實驗室的形式獲得準確測量結(jié)果的裝置與儀器"，即POCT設(shè)備。POCT也可以被解釋為靠近患者的床旁檢測，醫(yī)生、護士甚至患者都可以操作，快速的現(xiàn)場檢測避免了標本采集送檢的過多流程，縮短了發(fā)現(xiàn)傳染病的時間，促進藥物早期合理使用，從而實現(xiàn)傳染病的早期防治目標。

一、POCT的發(fā)展

POCT具有操作簡便、便攜、智能化等優(yōu)點，近年來作為體外診斷技術(shù)發(fā)展迅速，被應(yīng)用在多個學(xué)科的檢測項目中。在感染性疾病檢測中，POCT也已經(jīng)成為十分重要的檢測技術(shù)，檢測項目廣泛，除了常見的CRP、降鈣素原、白介素-6等細胞因子的快速檢測，還包括各種細菌、病毒等多種病原微生物的檢測。

隨著生物醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，干化學(xué)技術(shù)、免疫層析技術(shù)、色譜、光譜、生物傳感器及光電分析技術(shù)、計算機芯片技術(shù)、自動化技術(shù)等的應(yīng)用以及免疫和分子生物技術(shù)的引進，POCT呈現(xiàn)出自動化和簡單化的趨勢，在臨床和社區(qū)醫(yī)療中發(fā)揮著重要的作用。POCT所應(yīng)用的技術(shù)原理正在從傳統(tǒng)的干化學(xué)技術(shù)、免疫層析技術(shù)等向生物傳感技術(shù)、微流控芯片技術(shù)等發(fā)展。

二、POCT技術(shù)在感染性疾病診斷的應(yīng)用

（一）免疫學(xué)檢測

POCT應(yīng)用的免疫學(xué)技術(shù)主要是膠體金免疫層析技術(shù)、免疫熒光技術(shù)、（電）化學(xué)技術(shù)、乳膠標記技術(shù)等，主要應(yīng)用于病原體的抗原和抗體檢測，病原體刺激機體產(chǎn)生細胞因子的檢測，快速時相反應(yīng)蛋白檢測和代謝產(chǎn)物毒素檢測等。

1．膠體金技術(shù)在病原體抗原抗體檢測中的應(yīng)用：

目前在臨床檢測中最常見的是膠體金檢測。膠體金免疫層析技術(shù)是以免疫層析技術(shù)、膠體金標記技術(shù)相結(jié)合的一種新型免疫學(xué)技術(shù)，其特點是單份測定、簡單快速，幾分鐘即可用肉眼觀察結(jié)果。該方法的優(yōu)點是簡單、快速、及時，缺點是靈敏度低，容易漏檢。膠體金法能夠直接檢測傳染病病原的抗原和抗體。

臨床應(yīng)用較廣的POCT抗原檢測包括：甲乙型流感抗原、呼吸道合胞病毒抗原（鼻咽部分泌物）、軍團菌抗原（尿）、隱球菌抗原、惡性瘧原蟲循環(huán)抗原和間日瘧原蟲抗原、班氏絲蟲抗原及利什曼原蟲抗原的檢測等。

POCT抗體檢測包括術(shù)前篩查項目[艾滋病病毒抗體（1+2）、梅毒螺旋體抗體、乙肝五項、丙肝抗體、乙型肝炎病毒表面抗原]，腎綜合征出血熱病毒抗體、乙型腦炎血清特異性抗體、單純皰疹病毒抗體、人巨細胞病毒IgM抗體、風疹病毒抗體、輪狀病毒抗體（糞便）、登革熱病毒抗體、淋球菌（分泌物）和泌尿生殖系沙眼衣原體（分泌物）、沙門菌血清抗體、抗幽門螺桿菌細胞毒素相關(guān)蛋白A抗體等，還能夠檢測弓形蟲抗體、包蟲體抗體、血吸蟲抗體、人囊蟲病等。

2．膠體金法在感染性疾病炎性指標中的應(yīng)用：

急性感染時膠體金法檢測CRP、降鈣素原、血清淀粉樣蛋白A（serum amyloid A protein，SAA）、白介素-6等。在診斷細菌或病毒感染時更加簡便快速，能夠滿足臨床即時檢測需求。SAA是細菌和病毒感染密切相關(guān)的標志物，其在判斷感染特別是病毒感染方面明顯優(yōu)于CRP和WBC，可作為早期感染的判別標志物。病毒感染后，SAA上升的幅度與病毒種類有關(guān)，SAA聯(lián)合CRP和WBC檢測能夠提高細菌或病毒感染診斷的可靠性。

3．其他POCT技術(shù)在感染性疾病免疫學(xué)檢測中的應(yīng)用：

免疫熒光技術(shù)分為直接免疫熒光和間接免疫熒光技術(shù)兩類，主要應(yīng)用于呼吸道病原體的抗原和抗體檢測，其優(yōu)點是直接在熒光顯微鏡下看到病原體，缺點是檢測時間長，需要熒光顯微鏡，要求人員有一定的形態(tài)學(xué)辨識能力。

電化學(xué)技術(shù)應(yīng)用于POCT病原體檢測，優(yōu)點是檢測病原體項目多（弓形蟲抗體、風疹病毒抗體、巨細胞病毒抗體、單純皰疹病毒抗體等），靈敏度高。缺點是特殊人群假陽性率高（孕婦）。

乳膠標記技術(shù)主要應(yīng)用于病原體的抗原和抗體檢測，例如狂犬病、日本乙型腦炎、隱球菌抗原等，其優(yōu)點是快速，缺點是假陽性率高，容易發(fā)生非特異反應(yīng)。

（二）病原體核酸檢測

1．微流控芯片技術(shù)：

1990年微型全分析系統(tǒng)（miniaturized total analysis system，μTAS）的概念提出之后，微流控芯片是μTAS中當前最活躍的領(lǐng)域和發(fā)展前沿，它將分析實驗室功能轉(zhuǎn)移到芯片上，即芯片實驗室（lab-on-a-chip，LOC）。

微流控芯片技術(shù)可將化學(xué)和生物等領(lǐng)域中涉及的樣品制備、反應(yīng)、分析、檢測等基本操作單元集成到一塊幾平方厘米的芯上，具有試劑樣品用量少、分析速度快的優(yōu)點，用于床旁檢驗已受到廣泛關(guān)注。微流控芯片將核酸提取、擴增以及檢測整合到微流控芯片上，降低了檢測的復(fù)雜性，是目前絕大多數(shù)核酸POCT所采用的技術(shù)平臺。

微流控芯片在病原體檢測的應(yīng)用，臨床采用Roche Cobas Liat系統(tǒng)，檢測包括A/B型流感、A群鏈球菌和A/B型流感加呼吸道合胞病毒，只需要15~20 min。利用微流控芯片擴增EB病毒，僅需0.5 μl樣品，反應(yīng)體積僅需1 μl，靈敏度為3×105拷貝/ml。

Cooper等實現(xiàn)了白色念珠菌的快速分離檢測，相對于傳統(tǒng)的微生物真菌培養(yǎng)需要幾天的時間鑒定，該檢測僅需3 h就可檢出血液中低至1個/ml的病原菌，使感染者能夠及時得到恰當?shù)木戎危�提高患者生存率，希望隨著技術(shù)的改進，繼續(xù)縮短檢測時間。檢測HIV病毒，每張微流控芯片可同時檢測7份樣本，整個檢測過程在20 min內(nèi)完成，且準確率達100%。

微流控芯片技術(shù)不僅檢測速度快，而且操作簡單，將含蠟樣芽胞桿菌的標本加入微流控芯片后，裝置自動完成整個檢測流程，檢測靈敏度為細胞103~104個/ml。感染性疾病的分子診斷相對于細菌培養(yǎng)方法，在靈敏度、快速等方面均有顯著優(yōu)勢，目前微流控生物傳感器對感染性疾病的檢測已實現(xiàn)了多樣品來源如唾液、口腔上皮細胞、血漿等，檢測種類涵蓋多種細菌、真菌、病毒檢測。

Oblath等將除核酸提取步驟外的一整套檢測流程整合到微流控芯片上，并利用氧化鋁薄膜為實時PCR擴增過程提供溫度循環(huán)條件，實現(xiàn)唾液中多種口腔鏈球菌的分型檢測，快速準確，檢測靈敏度為8~12拷貝/μl。Cepheid公司的Xpert檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin resistant Staphylococcus aureus，MRSA）對比常規(guī)細菌培養(yǎng)方法，大大地縮短了陰性結(jié)果的周轉(zhuǎn)時間，靈敏度和特異度都大大提高。

Xpert MTB/RIF可以直接從原始痰標本中快速、敏感地檢出結(jié)核分枝桿菌及利福平耐藥性。WHO認可并推薦Xpert MTB/RIF在結(jié)核病防治規(guī)劃中的應(yīng)用。在非洲進行的一項多中心、隨機、對照試驗評估了Xpert MTB/RIF即時檢驗對結(jié)核病的可行性、準確性和臨床療效，結(jié)果顯示Xpert MTB/RIF可以在初級保健機構(gòu)由護士準確操作，由此可使更多的患者當天就開始治療，以縮短開始治療的時間。

核酸檢測的微流控芯片也在朝著高通量方向發(fā)展，一次檢測可以完成多種微生物鑒定、多種藥物敏感基因的分型�；�于微流控技術(shù)實現(xiàn)人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）基因分型，能檢測和識別17個HPV高危型和7個HPV低危型。檢測限103拷貝數(shù)/L，某些型別甚至更低。

法國梅里埃Filmarray檢測平臺，能夠在單次反應(yīng)中對多種病原體核酸進行檢測，具有很高的靈敏度和特異度，幫助醫(yī)生對患者感染及早診斷和正確用藥。該產(chǎn)品目前具有上呼吸道感染（19種病毒和3種細菌）、胃腸道感染（13種細菌、5種病毒和4種寄生蟲）和腦膜炎/腦炎（6種細菌、7種病毒和1種真菌）等多種病原檢測試劑盒。

2．微流控芯片聯(lián)合等溫擴增技術(shù)：

將核酸擴增與微流控芯片技術(shù)聯(lián)用開展POCT檢測，但是如果現(xiàn)場檢測儀器不具備溫控系統(tǒng)則很難應(yīng)用于POCT檢測，而整合環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）可在恒溫條件下實現(xiàn)快速擴增，操作簡便快捷，更便于現(xiàn)場使用。

在DNA病毒檢測方面，Cai等采用逆轉(zhuǎn)錄LAMP檢測乙肝病毒，并采用常規(guī)分子生物學(xué)方法評價該法性能，檢出限為210 IU/ml。在RNA病毒檢測方面，Kurosaki等建立了逆轉(zhuǎn)錄LAMP法檢測馬爾堡病毒，靈敏度可達102拷貝/μl，該法可在40 min內(nèi)檢測出馬爾堡病毒。

Kurosaki等建立的針對扎伊爾型埃博拉病毒的檢測逆轉(zhuǎn)錄LAMP方法，在26 min內(nèi)即可檢測出20拷貝/μl的扎伊爾型埃博拉病毒，同時特異性較高，與親緣性較近的病毒核酸序列（如蘇丹型埃博拉和馬爾堡病毒等）沒有交叉反應(yīng)。在細菌檢測方面，采用LAMP技術(shù)檢測結(jié)核分枝桿菌的試劑盒面市，該試劑盒檢測陽性痰液中結(jié)核菌的靈敏度為98.2%，直接檢測肺結(jié)核陽性患者的診斷靈敏度為88.2%，整個檢測過程在1 h內(nèi)完成，并且操作簡便，為基層POCT檢測提供了方便。

因此整合LAMP和微流控技術(shù)，以可控流體貫穿反應(yīng)過程，將多個操作平臺集成在一張芯片上，具有集成化和微型化的優(yōu)勢。

Alere流感A/B測試使用等溫擴增和分子信標探針技術(shù)，5 min完成鼻拭子標本的流感病毒A/B檢測。基于微流控等溫擴增技術(shù)的甲型H1N1流感病毒檢測，反應(yīng)體系3 μl，可在30 min內(nèi)完成檢測，最低檢測限可達10拷貝/μl。Ma等設(shè)計了一個集成、自驅(qū)動的微流控芯片用于數(shù)字LAMP反應(yīng)，整個檢測過程可以通過毛細作用力在芯片上自動完成，30 min對耐萬古霉素腸球菌菌株特異性基因進行擴增，檢測限僅為11個拷貝/μl。

3．納米孔測序技術(shù)：

納米孔測序技術(shù)也被公認為未來測序發(fā)展的一大方向。與以往的測序技術(shù)皆有不同，它不是通過檢測光、熒光信號顏色或pH來實現(xiàn)堿基序列的讀取，而是基于電信號的測序技術(shù)。蛋白質(zhì)納米孔（微型的小孔，其本質(zhì)是在膜上形成通道）被嵌入在合成膜上，并浸沒在電生理溶液中，使離子電流通過納米孔。

在像DNA或RNA這樣的分子通過納米孔時，會對電流帶來干擾，引起電流信號的特征性改變。在此過程中，信號被實時分析，用來確定正在通過該孔的DNA或RNA鏈的堿基序列。納米孔會分析通過它的整個DNA或RNA片段。

因此，在納米孔測序中，讀長長度與制備樣本中DNA或RNA的長度一致。用戶可以根據(jù)他們想要的實驗結(jié)果來選擇恰當?shù)臉悠分苽浞椒�，生成最適合的讀長長度。目前，使用標準的DNA提取方法已能夠獲得數(shù)萬到數(shù)十萬堿基的讀長，而由納米孔社區(qū)用戶設(shè)計的溫和提取法已獲得了超過2 000 000 bp的讀長。

納米孔技術(shù)提供的是動態(tài)、實時的測序，支持在幾分鐘內(nèi)就獲得病原體鑒定等時間關(guān)鍵型應(yīng)用的檢測結(jié)果。用戶可以在測序早期了解樣本的質(zhì)量和狀態(tài)，也可以在獲得足夠的數(shù)據(jù)后停止測序。

未來，快速的采樣到結(jié)果周轉(zhuǎn)時間在感染性疾病、實地動態(tài)監(jiān)測疫情暴發(fā)以及其他診斷方面具有巨大潛力。Kafetzopoulou等報道拉沙熱暴發(fā)，納米孔測序儀對36個基因組測序，拉沙熱病毒與前一年病原體存在系統(tǒng)發(fā)育混交，表明存在獨立的人畜共患的風險。

三、POCT技術(shù)在感染性疾病診斷應(yīng)用中的局限性

在POCT帶來便捷快速的檢測方式的同時，在感染性疾病病原體檢測中還存在幾個問題。

首先，缺乏適宜的校準物質(zhì)和質(zhì)控品、質(zhì)控不規(guī)范。準確性評價標準各異，導(dǎo)致其檢測的溯源性和可比性差，缺乏實用的標準。目前只有針對血糖、血氣、凝血方面的POCT管理指南，沒有感染病疾病快速診斷的管理指南，需要建立一個系統(tǒng)、完善的質(zhì)量控制體系，減少POCT設(shè)備的檢驗結(jié)果與常規(guī)實驗室的誤差，保證準確性。

其次，廠家多、試劑雜，由于受檢測方法、樣本類型及人員操作等因素影響，結(jié)果不一致。雖然POCT操作簡單，但對POCT操作人員進行培訓(xùn)，建立一個較為客觀的操作標準和評判指標，會提高結(jié)果的準確性。

第三，國內(nèi)缺乏衛(wèi)生經(jīng)濟學(xué)評價，加拿大藥物和技術(shù)衛(wèi)生機構(gòu)報道檢測丙型肝炎病毒不同策略的檢測成本，在OraQuick定性檢測和實驗室常規(guī)核酸定量檢測之間，人均成本是相似的，約30美元。

第四，POCT核酸的結(jié)果應(yīng)考慮個體內(nèi)生物變異的存在，病原體核酸定量檢測結(jié)果可能在一定的范圍內(nèi)波動，但對患者病情判斷無影響。如果可能，應(yīng)在定量檢測的結(jié)果報告中加入變異范圍，如HIV-1病毒載量的變異容許限為<0.5 Log，HCV病毒載量的變異容許限為<1 Log。必要時需標注檢測可能的局限性，以及可能會影響結(jié)果判讀和應(yīng)用的因素。

實驗室應(yīng)記錄并保存關(guān)于每個標本檢測情況的充分信息，并應(yīng)根據(jù)相關(guān)的法律法規(guī)和相應(yīng)的管理規(guī)定對具有重要意義的傳染�。ㄈ缛祟惷庖呷毕菥C合征、埃博拉病毒等新發(fā)突發(fā)傳染病、肺結(jié)核等）的診斷，及時與負責的臨床醫(yī)師溝通并備案，同時注意保護患者的醫(yī)療信息。

第五，結(jié)合患者的疾病分期，進行相應(yīng)POCT檢測，例如黃熱病的病毒血癥期是一過性的，在病毒血癥期檢測血中黃熱病毒核酸呈現(xiàn)陽性，但在恢復(fù)期血中黃熱病毒核酸呈現(xiàn)陰性，尿中黃熱病毒核酸為陽性。在男性感染寨卡病毒6個月后的精液中仍然能夠檢測到寨卡病毒的核酸。

四、展望

感染性疾病的快速診斷是當前POCT技術(shù)應(yīng)用的熱點，比起傳統(tǒng)病原學(xué)檢測方法，POCT在診斷上更加快速和靈敏。POCT是初級衛(wèi)生保健機構(gòu)提供給患者的快速檢測手段，常用的檢測平臺是測流免疫方法。最近，新興的分子診斷技術(shù)滿足了POCT檢測速度，低成本的特點。

POCT分子檢測方法縮短樣本檢測時間，并能保證高特異性和敏感性，在現(xiàn)有基礎(chǔ)上，開發(fā)出針對各種感染性疾病的診斷試劑和儀器，仍將是POCT技術(shù)的開發(fā)重點。需要聯(lián)合多學(xué)科協(xié)作，研發(fā)國產(chǎn)的有自主知識產(chǎn)權(quán)的一體化的便攜式分子POCT檢測設(shè)備，實現(xiàn)多通道和自動化檢測，提高其現(xiàn)場適用性。隨著分析技術(shù)融入更多的先進科技，POCT正朝著互聯(lián)網(wǎng)整合模式發(fā)展，逐漸實現(xiàn)智能化、共享化、云端化，從而推動遠程醫(yī)療的發(fā)展，實現(xiàn)個性化的服務(wù)。