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假如您從事新冠核酸檢測(cè)體系的開發(fā)和評(píng)估，想問(wèn)問(wèn)您是否遇到過(guò)以下問(wèn)題：

? 非特異性擴(kuò)增、引物二聚體？

? 靈敏度上不去，檢出率低？

? Taq酶性能不穩(wěn)定，qPCR線性關(guān)系差？

遇到這些問(wèn)題莫要慌，翊圣Hieff? Taq酶單克隆抗體來(lái)救駕！ Hieff? Taq酶單克隆抗體高效封閉Taq酶的DNA聚合酶活性，減少非特異擴(kuò)增，增加穩(wěn)定性，可助力你的單拷貝檢測(cè)！

Hieff? Taq酶單克隆抗體的工作原理

我們知道新冠病毒的核酸檢測(cè)首先要避免的就是非特異性擴(kuò)增，因?yàn)榉翘禺愋詳U(kuò)增不僅直接影響檢測(cè)結(jié)果的判讀，還會(huì)消耗反應(yīng)體系中的引物等物料，導(dǎo)致目的基因擴(kuò)增失敗。 Hieff? Taq酶單克隆抗體可以在低溫時(shí)，結(jié)合于Taq DNA聚合酶，封閉其聚合酶活性，防止錯(cuò)配或引物二聚體引起非特異性擴(kuò)增；在PCR預(yù)變性95℃加熱時(shí)，抗體蛋白變性，釋放DNA聚合酶活性，完成擴(kuò)增反應(yīng)，此正所謂抗體法熱啟動(dòng)的原理。

Hieff? Taq酶單克隆抗體在新冠核酸檢測(cè)中的作用

我們?cè)谛鹿诤怂釞z測(cè)試劑的開發(fā)工作中，發(fā)現(xiàn)了許多Hieff? Taq酶單克隆抗體的大作用。

1. Hieff? Taq酶單克隆抗體有助于提高檢測(cè)靈敏度

以CDC推薦引物探針?lè)桨�，翊圣Hieff Unicon? V Universal Multiplex One Step  RT-qPCR Probe Kit（Cat#11213ES）檢測(cè)105 copies / mL（圖1）和103 copies / mL（圖2）的假病毒。圖中紅色曲線為Hieff? Taq酶單克隆抗體以1:5封閉（測(cè)定封閉效率為97.34%）進(jìn)行的擴(kuò)增反應(yīng)的擴(kuò)增曲線；黑色曲線為1:15封閉（測(cè)定封閉效率為19.06%）進(jìn)行的擴(kuò)增反應(yīng)的擴(kuò)增曲線。

圖1Hieff Unicon? V Universal Multiplex One Step  RT-qPCR Probe Kit（Cat#11213ES）檢測(cè)105 copies / mL假病毒

圖2 Hieff Unicon? V Universal Multiplex One Step  RT-qPCR Probe Kit（Cat#11213ES）檢測(cè)103 copies / mL假病毒

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)于高拷貝檢測(cè)，使用抗體可提高平臺(tái)期熒光強(qiáng)度；對(duì)于低拷貝檢測(cè)，使用抗體不僅提高平臺(tái)期熒光強(qiáng)度，還能使Ct值提前，提升靈敏度。

2. Hieff? Taq酶單克隆抗體助力個(gè)位數(shù)拷貝檢出

我們利用Hieff? Taq酶單克隆抗體優(yōu)化生成高靈敏度檢測(cè)試劑Hieff Unicon? V Universal Multiplex One Step  RT-qPCR Probe Kit（Cat#11213ES），以某IVD企業(yè)ORF1ab和N基因的探針和引物，檢測(cè)個(gè)位數(shù)拷貝的假病毒，檢出率結(jié)果如圖3。

圖3 檢出率測(cè)試：25 μL反應(yīng)體系加5 μL假病毒，20復(fù)孔檢測(cè)檢出率

檢出率測(cè)試結(jié)果顯示，500 copies / mL（2.5 copies / rxn）的假病毒檢出率為95%。

3. 使用Hieff? Taq酶單克隆抗體獲得良好的線性關(guān)系

以CDC推薦引物探針?lè)桨�，翊圣Hieff Unicon? V Universal Multiplex One Step  RT-qPCR Probe Kit（Cat#11213ES）檢測(cè)107 - 104copies / mL的假病毒。圖中紅色曲線為Hieff? Taq酶單克隆抗體以1:5封閉（測(cè)定封閉效率為97.34%）進(jìn)行的擴(kuò)增反應(yīng)的擴(kuò)增曲線；黑色曲線為1:15封閉（測(cè)定封閉效率為19.06%）進(jìn)行的擴(kuò)增反應(yīng)的擴(kuò)增曲線。

圖4 10倍梯度稀釋假病毒擴(kuò)增曲線

標(biāo)準(zhǔn)曲線顯示，封閉效率為97.34%的擴(kuò)增結(jié)果線性良好，R2=0.9978；封閉效率為19.06%的擴(kuò)增結(jié)果線性較差，尤其對(duì)于低拷貝數(shù)的檢測(cè)，Ct值變大，線性相關(guān)性只有0.0089。

如此優(yōu)秀的Taq酶單克隆抗體，你從何而來(lái)

1. 成熟的放大生產(chǎn)工藝——翊圣Hieff? Taq酶單克隆抗體是翊圣生物自研自產(chǎn)的一款高品質(zhì)熱啟動(dòng)封閉抗體。小鼠腹水生產(chǎn)，月產(chǎn)量高達(dá)40g。不同于人工操作體外模擬生長(zhǎng)環(huán)境的罐間懸浮生產(chǎn)，小鼠腹水能提供天然的細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境，營(yíng)養(yǎng)充足，有利于雜交瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。另一方面腹水屬于天然免疫系統(tǒng)，抗體折疊修飾翻譯更加天然，保證了抗體的結(jié)構(gòu)性能。

2. 高標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)流程和專業(yè)的研發(fā)團(tuán)隊(duì)——翊圣Hieff? Taq酶單克隆抗體經(jīng)歷了高標(biāo)準(zhǔn)的生產(chǎn)流程，細(xì)微之處做到極致。包括生產(chǎn)環(huán)節(jié)中諸多要求，如在超凈工作臺(tái)區(qū)域進(jìn)行防污染的佐劑致敏，篩選出高抗體表達(dá)量的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)，高純度標(biāo)準(zhǔn)，溫和的純化工藝等。值得一提的是，熱啟動(dòng)封閉抗體結(jié)合位點(diǎn)非常重要，一個(gè)優(yōu)質(zhì)的熱啟動(dòng)封閉抗體，應(yīng)該能精準(zhǔn)結(jié)合，有效阻斷DNA聚合酶的聚合酶活性。翊圣為此做了大量篩選工作，最終成功篩得這款可封閉各種Taq酶突變體的抗體。

3. 嚴(yán)苛的質(zhì)量控制——翊圣Hieff? Taq酶單克隆抗體的質(zhì)量控制包括核酸外切酶殘留、核酸內(nèi)切酶殘留、小鼠核酸殘留、功能驗(yàn)證（圖5）、封閉效率檢測(cè)、批內(nèi)穩(wěn)定性、批間穩(wěn)定性等。封閉效率的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)為95%，對(duì)標(biāo)業(yè)內(nèi)最高標(biāo)準(zhǔn)。

圖5 熔解曲線測(cè)定性法：設(shè)置非熱啟動(dòng)組、抗體封閉組、和無(wú)聚合酶對(duì)照組，將模板和引物對(duì)加入SYBRGreen染料法qPCR的反應(yīng)體系中，37℃孵育40min，分別檢測(cè)熔解曲線。非熱啟動(dòng)組顯示出有擴(kuò)增產(chǎn)物生產(chǎn)，而另外兩組是引物二聚體，沒(méi)有產(chǎn)物形成。這說(shuō)明抗體封閉效果明顯。