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由新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）導致的肺炎COVID-19目前防控形勢持續(xù)嚴峻，檢測需求將可能進一步加大，甚至可能長期存在需求。針對新冠病毒的特異性抗體IgM/IgG檢測試劑盒，對設備和人員要求低，適合大規(guī)�？焖倥挪椋�起到了與PCR核酸檢測法互相補充以提高診斷效果的作用。但應用實踐中發(fā)現POCT類快檢試劑盒存在不同廠家、不同批次的檢測準確度差異較大的情況。作為POCT廠家如何以質求勝，關鍵看誰能夠把控核心蛋白原料的安全性。

穩(wěn)定批量生產高活性、高純度的宿主抗原蛋白是制造高品質抗體檢測試劑盒的關鍵。因為穩(wěn)定的高純度、高活性蛋白能特異性更強的結合血清中的抗體，從而降低假陽性的出現。而要大規(guī)模制備高穩(wěn)定性的抗體檢測試劑盒，就對核心蛋白原料供應商的批次供應能力和批間穩(wěn)定性水平提出了更高的要求。

北京同立海源生物科技有限公司，作為十余年專業(yè)從事真核重組蛋白研究的“中國品牌”，自新冠疫情爆發(fā)以來，密切關注疫情發(fā)展態(tài)勢，快速自主研發(fā)生產了新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）真核表達N蛋白、S1蛋白、S-RBD-Fc蛋白，為IVD試劑廠家提供性能優(yōu)異的核心蛋白原料，助力全球抗疫。

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CHO穩(wěn)定細胞株表達的新冠病毒S-RBD-Fc蛋白

同立海源生物的新冠病毒S-RBD-Fc蛋白采用CHO穩(wěn)定細胞株表達，蛋白批次穩(wěn)定性高，經還原SDS-PAGE和SEC-HPLC檢測其純度均達95%以上，業(yè)內領先。最快兩周可實現單批次10g級生產，充分的產能保障是檢測試劑盒廠家的良好可選合作伙伴。 

 圖1 RBD蛋白SEC-HPLC

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經驗證的HEK 293真核表達N蛋白

N蛋白作為核衣殼會保護病毒自身RNA——能夠識別RNA并與之連接，并且可自結合成為低聚物外殼，對病毒粒子組裝具有重要意義，常被作為冠狀病毒診斷檢測原料。

同立海源生物生產的N蛋白（重組SARS-CoV-2核衣殼蛋白）采用HEK293真核細胞表達，具備翻譯后的修飾功能，其表達的重組蛋白更接近天然蛋白結構，有效避免了原核蛋白不正確折疊和存在的血清與抗原之間的交叉反應。經POCT試紙條的對比驗證數據表明，其公司真核系統表達的重組蛋白抗原交叉反應少，假陽性率低，更加適合作為高精度抗體檢測試劑盒的核心原料。

 圖2 正常人血清的POCT試紙條的檢測結果

通過ELISA實驗檢測SARS-CoV-2的N蛋白與抗體結合能力，獲知蛋白活性高，

EC50＜0.5ng/ml。

圖3 重組N蛋白與NP多抗的結合ELISA

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HEK 293真核表達S1蛋白，經驗證生物學活性高

同立海源生物研發(fā)的SARS-CoV-2真核表達S1蛋白，經動物實驗發(fā)現其對小鼠的病理改變與SARS-CoV-2極為相似，這不僅提示S1蛋白可能是SARS-CoV-2發(fā)揮作用的關鍵蛋白,而且通過在動物實驗中發(fā)現重組S1蛋白在肺損傷中的作用，也證明了與天然S1蛋白有十分相似的生物學活性。

圖4 對照組和實驗組小鼠肺部形態(tài)
圖5 對照組和實驗組小鼠肺組織病理切片
由圖可見對照組肺組織結構均勻完整，肺泡腔結構清晰，未見中性粒細胞浸潤；實驗組肺組織出現彌漫性出血情況，肺泡塌陷斷裂融合，漿細胞、淋巴細胞、組織細胞聚集，可見少量中性粒細胞。（以上數據來源于湖州中心醫(yī)院 孟志鵬）