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一、臨床標本細菌檢驗的基本程序

二、血液感染

◆正常人的血液是無菌的。

◆菌血癥是指在血液中可檢測到細菌，包括一過性和持續(xù)性在血中存在。
◆敗血癥是指病原菌侵入血流后，在其中大量繁殖并產(chǎn)生毒性產(chǎn)物，引起全身中毒癥狀。
◆膿毒血癥是指化膿性細菌敗血癥時，細菌通過血流擴散至全身其他組織或器官，產(chǎn)生新的化膿性病灶。

（一）常見病原菌

（二）標本采集

1.采血時間和頻率　 
病人發(fā)熱初期或高峰期采集，或在未用抗生素前采集。但懷疑細菌性心內(nèi)膜炎時，血培養(yǎng)不少于三次。

2.采血量　 
一般為靜脈采血，成人采血量10～20ml，兒童3～5ml，嬰兒1～2ml。 

3.床邊直接注入血液培養(yǎng)基，否則用SPS抗凝劑送檢，不得用EDTA，枸櫞酸鈉抗凝。

4.檢查血管內(nèi)導管有無細菌污染，可無菌操作，剪下導管5cm遠側(cè)段，置無菌容器內(nèi)送檢。

（三）微生物分離培養(yǎng)和鑒定

1.培養(yǎng)基的選擇　 
用自動血培養(yǎng)分析儀時選用相應的血培養(yǎng)瓶，如需氧＋厭氧，需氧＋高滲等。

2.分離和鑒定　當觀察有細菌生長時或血培養(yǎng)儀陽性報警時，應及時作如下檢驗：
（1）涂片染色鏡檢，結(jié)果及時與臨床聯(lián)系；
（2）轉(zhuǎn)種血平板、巧克力平板、厭氧血平板或其他特殊培養(yǎng)基等分離培養(yǎng)純菌再進行鑒定；
（3）同時做藥敏試驗，結(jié)果及時報告臨床作治療參考。

（四）報告方式

陰性結(jié)果： 
◆7d報告無細菌生長。 
◆疑為亞急性細菌性心內(nèi)膜炎、布魯菌病、厭氧菌血癥、真菌血癥時，血培養(yǎng)至少連續(xù)培養(yǎng)2～3周，仍無細菌生長者可報告為陰性。
陽性結(jié)果——三級報告方式： 
◆第一級報告告知標本已出現(xiàn)陽性并報告直接細菌涂片結(jié)果，同時做初步藥敏試驗； 
◆第二級是報告初步藥敏結(jié)果，同時做正式鑒定和藥敏試驗； 
◆第三級報告正式鑒定和藥敏試驗結(jié)果。

（五）臨床意義

◆葡萄球菌菌血癥常由癤、癰、膿腫及燒傷創(chuàng)面等原發(fā)感染灶繼發(fā)，也可由呼吸道感染引起。 
◆G-菌主要侵犯危及機體免疫功能低下的病人，耐藥菌株不斷增加。 
◆厭氧菌的菌血癥常合并需氧菌感染，臨床癥狀較重而復雜。 
◆L型菌的菌血癥主要由于使用抑制細菌細胞壁合成的抗生素后，由缺損細胞壁的細菌感染所致。 
◆免疫低下者常出現(xiàn)真菌菌血癥。 
◆院內(nèi)感染菌血癥不斷上升。

三、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染

（一）常見病原微生物 

（二）標本采集

◆用藥前，無菌操作腰穿方法采集2～3ml，盛于無菌試管常溫下立即送檢。 
◆天冷時保溫，不可冰箱保存。 
◆用于病毒檢測時應冷藏送檢。

（三）檢驗方法

1.涂片鏡檢　離心3000rpm，15分鐘。 
革蘭染色（一般細菌）、抗酸染色（分支桿菌）、墨汁染色（隱球菌）、電鏡檢查（病毒顆粒）。
2.分離培養(yǎng)　5g/L葡萄糖增菌肉湯、血平板、中國藍瓊脂平板或麥康凱瓊脂平板、巧克力平板。結(jié)核菌接種羅-琴培養(yǎng)基或米氏7H10培養(yǎng)基。真菌培養(yǎng)接種沙氏培養(yǎng)基。病毒培養(yǎng)常用動物接種、雞胚接種、細胞培養(yǎng)。
3.血清學檢測可直接檢測抗原。

（四）臨床意義

◆細菌性腦膜炎是中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的常見類型。 
◆真菌性腦膜炎最常見于隱球菌腦膜炎，其他的真菌性腦膜炎如白假絲酵母、球孢子性腦膜炎日漸增多，特別是免疫功能低下和惡性疾病患者易發(fā)。 
◆流行性乙型腦炎可獲得持久免疫力，再次發(fā)病者極少見。 
◆腸道病毒對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的危害性逐漸引起人們的關注和重視。

四、呼吸道感染

呼吸道按解剖結(jié)構分為上呼吸道和下呼吸道。 
◆上呼吸道感染主要指喉及喉以上的呼吸道感染。 
◆下呼吸道感染主要指氣管、支氣管和肺的感染。

（一）上呼吸道的正常菌群 

1.球菌　凝固酶陰性葡萄球菌，鏈球菌，微球菌，奈瑟菌，厭氧球菌。
2.桿菌　棒狀桿菌，嗜血桿菌，類桿菌，梭桿菌。

 （二）常見病原微生物 

（三）標本采集

1.采集方法
（1）上呼吸道：常采用鼻咽拭子；在扁桃體部位、咽后壁及口腔內(nèi)炎癥、潰瘍或滲出部位采樣時，應先用清水漱口，再采集標本。
（2）下呼吸道：常采用自然咳痰法、支氣管鏡采集、胃內(nèi)采集、咽拭子。清晨第一口痰為宜，最好在用抗菌藥物前采集，必須先用清水漱口，避免唾液混入。
2.立即送檢。

（四）檢驗方法

1.涂片： 
◆檢查細菌常用革蘭染色、抗酸染色； 
◆檢查隱球菌采用墨汁染色； 
◆軍團菌、支原體、病毒等可用免疫熒光抗體染色。 
◆合格的痰標本： 
白細胞＞25個/低倍視野，鱗狀上皮細胞＜10個/低倍視野。 

2.分離培養(yǎng)
（1）痰標本的前處理一般是用無菌生理鹽水將痰洗凈，再加入胰酶溶液使痰均質(zhì)化。
（2）普通細菌培養(yǎng)采用血平板、中國藍瓊脂平板或麥康凱瓊脂平板、巧克力平板。

（五）臨床意義

◆注意采集合格的下呼吸道標本，以提高檢出率和陽性的正確率。 

◆一些條件致病菌和耐藥菌成為醫(yī)院內(nèi)肺炎的主要致病菌。 
◆真菌性肺炎多為條件致病性真菌感染，常見的以白假絲酵母菌為主。 

五、尿路感染

◆上尿路感染：主要有腎盂腎炎 
◆下尿路感染：主要有膀胱炎和尿道炎

（一）常見病原微生物

（二）標本采集
1.采集時間　一般為晨起第1次尿送檢。

2.采集方法　 
◆清潔中段尿：常采用，采集標本前要用肥皂水或碘附清洗外陰（女性）或陰莖頭（男性）。 
◆腎盂尿采集法； 
◆膀胱穿刺法； 
◆導尿法：最好，防止逆行性感染。

3.注意事項　 
◆嚴格進行無菌操作，盡量避免污染菌，立即送檢，不超過1h，尿中不得加任何防腐劑和消毒劑。

（三）分離培養(yǎng)

1.培養(yǎng)基的選擇　 
◆普通細菌選用血平板、中國藍瓊脂平板或麥康凱瓊脂平板。特殊細菌使用特殊、選擇培養(yǎng)基。
2.尿細菌定量培養(yǎng)。

（四）結(jié)果報告

1.陰性　一般48h無細菌生長。

2.陽性　菌落計數(shù)、鑒定及藥敏結(jié)果。 
◆G-桿菌＞105cfu/ml； G+球菌＞104cfu/ml，有診斷意義。 
◆G+球菌＜104cfu/ml，多為污染；G+球菌104～105cfu/ml，可疑陽性。 

3.尿路感染的細菌數(shù)少于105CFU／ml時多見于以下幾種情況： 
◆應用抗菌藥物，尿中細菌發(fā)育受到抑制； 
◆使用低敏感性藥物，大多數(shù)細菌停留在104CFU／ml； 
◆尿濃度變化大時及pH在5.0以下8.5以上，則發(fā)育受阻； 
◆尿頻時； 
◆病原菌發(fā)育要求條件高時； 
◆采尿時外陰部消毒劑混入尿中。

六、消化道感染

（一）常見病原菌 

◆腸毒素為主的病原菌： 金葡，霍亂弧菌，志賀菌，ETEC/EHEC/EAggEC，產(chǎn)氣莢膜梭菌，艱難梭菌 
◆侵襲性為主的病原菌： 沙門菌，志賀菌，EPEC/EIEC，小腸結(jié)腸炎耶爾森菌，副溶血弧菌，結(jié)核分枝桿菌，白假絲酵母菌 
◆病毒：輪狀病毒，�？瞬《�，Norwalk病毒，腺病毒

（二）標本采集與運送

1.采集時間　急性期、盡量在用藥前采集。
2.采集方法　 
◆自然排便采集法、直腸拭子。 
◆標本不能及時接種時，應在標本中加保護劑或用相應的運輸培養(yǎng)基。 

（三）分離培養(yǎng)

培養(yǎng)基的選擇： 
◆普通致病菌如沙門菌、志賀菌等可選用SS瓊脂平板、中國藍瓊脂平板或麥康凱瓊脂平板。 
◆特殊細菌如彎曲菌、弧菌、厭氧菌等選擇相應的選擇性培養(yǎng)基。 
◆病毒可用細胞培養(yǎng)。

（四）臨床意義

◆感染性腹瀉由多種病原體感染所致。 
◆消化性潰瘍由幽門螺桿菌感染引起。 
◆輪狀病毒常引起幼兒腹瀉，腺病毒是引起兒童腹瀉的主要病原，還可引起成人腹瀉，埃可病毒常引起嬰幼兒腹瀉，Norwalk病毒常感染成人和大齡兒童。

七、性傳播疾病

性傳播疾�。⊿TD）：以性行為為主要傳播途徑的-組傳染病。

（一）常見性傳播疾病及其病原體

性傳播疾�。好范�、淋病、軟下疳、性病淋巴肉芽腫、細菌性陰道病、非淋菌性尿道炎、尖銳濕疣、生殖器皰疹、病原體   、梅毒螺旋體、淋病奈瑟菌、杜克嗜血桿菌、沙眼衣原體性病淋巴肉芽腫生物亞種、陰道加德納菌和類桿菌等厭氧菌、沙眼衣原體沙眼生物亞種、支原體、人乳頭瘤病毒、人類單純皰疹病毒2型

（二）標本采集

◆拭子取尿道膿性分泌物（男性）或?qū)m頸分泌物（女性），供培養(yǎng)及鏡檢； 
◆梅毒病人取皮膚滲出液和淋巴穿刺液涂片； 
◆皰疹抽取皰內(nèi)液體，或刺破小皰后，用無菌拭子采樣。

八、創(chuàng)傷和外科感染

（一）常見病原菌

（二）標本采集

◆組織創(chuàng)傷用拭子采集標本； 
◆施行清創(chuàng)術時，可選擇合適部位采集標本送檢； 
◆骨髓炎病人應取骨髓活檢標本，如損害部位已形成竇道，可采取竇道引流液； 
◆膿腫時取內(nèi)部膿汁及膿腫壁標本�！　�

（三）臨床意義

◆由創(chuàng)傷、手術、侵入性器械操作等外科治療引起的感染最為常見。 
◆感染以化膿性炎癥改變?yōu)橹�。外傷性�?chuàng)傷感染以葡萄球菌和鏈球菌多見。 
◆深部創(chuàng)傷易引起破傷風和氣性壞疽。 
◆燒傷創(chuàng)面以革蘭陰性桿菌最常見，次為革蘭陽性球菌感染。 
◆急性化膿性骨關節(jié)炎常由金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球菌、肺炎鏈球菌、淋病奈瑟菌感染所致。
◆慢性化膿性骨關節(jié)炎、慢性骨髓炎常由結(jié)核分枝桿菌引起，葡萄球菌、鏈球菌也常見。