
糞便檢查
直接涂片法 direct smear method
常用的檢查寄生蟲病的方法,可以針對檢查蠕蟲卵、原蟲包囊和滋養(yǎng)體的不同而選擇不同的染色法,方法簡便,可連續(xù)3次涂片,提高檢出率。
集卵透明法 egg concentration-transparency method
將糞便充分?jǐn)噭蚝,?g加水調(diào)成糞液,經(jīng)銅絲篩過濾,用分為內(nèi)袋和外袋的尼龍袋收集,用藥勺刮取外袋內(nèi)全部沉渣,分作涂片。覆蓋經(jīng)甘油孔雀綠溶液浸漬24 h的親水玻璃紙,以載玻片壓勻,室溫過夜,次日鏡檢。
厚涂片透明法(改良加藤法) modified Kato's thick smear
取約50 mg [ 已用150 μm(100目)不銹鋼篩除去糞渣 ] 糞便,置于載玻片,覆以浸透甘油孔雀綠溶液的玻璃紙片,輕壓,使糞便展開(20 mm×25 mm)。置于30℃~36℃溫箱中30 min后鏡檢。
濃聚法 concentration method
利用原蟲包囊和蠕蟲卵比重大,可沉積于水底或利用比重較大的液體,使原蟲包囊或蠕蟲卵上浮,集中于液體表面,檢獲包囊或蟲卵的方法。
沉淀法 sedimentation method
利用原蟲包囊和蠕蟲卵比重大,可沉積于水底的特點(diǎn),檢獲蟲卵的方法。常用的有重力沉淀法、離心沉淀法和汞碘醛離心沉淀法。
重力沉淀法 gravity sedimentation
自然沉淀法 natural sedimentation
主要用于蠕蟲卵檢查。蠕蟲卵比重大于水可沉淀于水底,使蟲卵濃集。取糞便20 g--30 g,加水制成混懸液,用金屬篩 [ 250μm - 380μm(40孔~60孔)] 或2層~3層濕紗布過濾,再加清水沖洗殘渣;過濾后的糞液在容器中靜置25 min,倒去上層液。重新加滿清水,以后每隔15 min - 20 min換水1次(共3次~4次),直至上層液清晰為止。最后倒去上層液。取沉渣做涂片鏡檢。如檢查包囊,換水間隔時間宜延長至約6h。
離心沉淀法 centrifuge sedimentation
將濾去粗渣的糞液離心(500 g) 1 min - 2 min,倒去上層液體,注入清水,再離心沉淀,如此反復(fù)沉淀3次~4次,直至上層液澄清為止,最后倒去上層液,取沉渣鏡檢。
汞碘醛離心沉淀法 merthiolate-iodine-formaldehyde centrifugation sedimentation method,MFC
本法適用于原蟲包囊、滋養(yǎng)體及蠕蟲卵和幼蟲的檢查。如準(zhǔn)確稱取lg糞便,即可做蠕蟲卵的定量檢查。取糞便lg,加適量(約10 mL)汞碘醛液,充分調(diào)勻,用2層脫脂紗布過濾,再加入乙醚4 mL,搖2 min,離心(500 g) 1 min - 2 min,即分成乙醚、糞渣、汞碘醛及沉淀物4層。吸棄上面3層,取沉淀鏡檢。
醛醚沉淀法 formalin-ether sedimentation
取糞便1 g - 2 g置于小容器內(nèi),加水10 mL~20 mL調(diào)勻,將糞便混勻液經(jīng)2層紗布 [ 或150μm(100目)金屬篩網(wǎng)]過濾,離心(500 g) 2 min;倒去上層糞液,保留沉渣,加水10 mL混勻,離心2 min;倒去上層液,加10%甲醛7 mL。5 min后加乙醚3 mL,塞緊管口并充分搖勻,取下管口塞,離心2 min;即可見管內(nèi)自上而下分為4層。取管底沉渣涂片鏡檢。
本法不僅濃集效果好,而且不損傷包囊和蟲卵的形態(tài),易于觀察和鑒定。對于含脂肪較多的糞便,本法效果優(yōu)于硫酸鋅浮聚法。但對布氏嗜碘阿米巴包囊、藍(lán)氏賈第鞭毛蟲包囊及微小膜殼絳蟲卵等的檢查效果較差。
浮聚法 flotation method
利用比重較大的液體,使原蟲包囊或蠕蟲卵上浮,集中于液體表面檢獲寄生蟲的方法。常用方法有飽和鹽水浮聚法、硫酸鋅離心浮聚法、蔗糖溶液離心浮聚法。
飽和鹽水浮聚法 brine flotation
用以檢查鉤蟲卵效果最好,也可用于檢查其他線蟲蟲卵和微小膜殼絳蟲蟲卵。但不適于檢查吸蟲卵和原蟲包囊。用竹簽取黃豆粒大小的糞便置于浮聚瓶中,加入少量飽和鹽水調(diào)勻,再慢慢加入飽和鹽水至液面略高于瓶口,以不溢出為止。此時在瓶口覆蓋一載玻片,靜置15 min后,將載玻片提起并迅速翻轉(zhuǎn),鏡檢。
硫酸鋅離心浮聚法 zinc sulfate centrifuge flotation
適用于檢查原蟲包囊、球蟲卵囊、線蟲卵和微小膜殼絳蟲卵。取糞便約lg,加入10倍~15倍的水,充分?jǐn)囁,按離心沉淀法過濾,反復(fù)離心(500g)3次~4次,至清水為止。最后倒去上清液,在沉淀中加入相對密度為1.18的硫酸鋅(33%的溶液),調(diào)勻后再加硫酸鋅溶液至距管口約1 cm處,離心1 min。用金屬環(huán)粘取表面的糞液置于載玻片上,加碘液1滴(查包囊),鏡檢。
蔗糖溶液離心浮聚法 flotation method with sucrose solution
適用于檢查糞便中隱孢子蟲卵囊。取糞便約5g,加水15 mL- 20 mL.以58μm(260目)尼龍袋或4層紗布過濾,取濾液離心(300g)5 min - 10 min,吸棄上清液,加蔗糖溶液再離心,然后如同飽和鹽水浮聚法,取其表面液鏡檢(高倍或油鏡)。
毛蚴孵化法 miracidium hatching method
利用血吸蟲卵內(nèi)的毛蚴在適宜溫度的清水中,可在短時間內(nèi)孵出的特性而設(shè)計的方法。取糞便30 g,先經(jīng)重力沉淀法濃集處理,再將糞便沉渣倒入錐形燒瓶內(nèi),加清水至瓶口,在20℃~30℃的條件下,經(jīng)4 h~6 h后用肉眼或放大鏡觀察結(jié)果,即可看到水面下有白色點(diǎn)狀物作直線來往游動。
肛門拭子法 anal swab
用于檢查肛周的蟯蟲卵或?稍诟亻T附近發(fā)現(xiàn)帶絳蟲卵。常用方法有棉簽拭子法和透明膠紙法。
棉簽拭子法 cotton swab
先將棉簽浸泡在生理鹽水中,取出時擠去過多的鹽水,在肛門周圍擦拭,隨后將棉簽放入盛有飽和鹽水的試管中,用力攪動,迅速提起棉簽,在試管內(nèi)壁擠干水分后棄去,再加飽和鹽水至管口處,覆蓋一載玻片,使其接觸液面,5 min后取下載玻片鏡檢。
透明膠紙法 cellophane tape
用長約6 cm,寬約2 cm的透明膠紙膠面粘貼肛門周圍的皮膚,然后將膠面平貼在載玻片上,鏡檢。
定量透明法 quantitative transparent method
適用于各種糞便內(nèi)蠕蟲卵的檢查及計數(shù)。應(yīng)用改良聚苯乙烯作定量板,大小為40 mm×30 mm×1.37 mm,?诪橐婚L圓定量板孔,大小為8 mm×4 mm,兩端呈半圓形,所取的糞樣平均為41.7 mg。將大小約4 cm×4 cm的150μm(100目)尼龍網(wǎng)或金屬篩網(wǎng)覆蓋在糞便標(biāo)本上,自篩網(wǎng)上用刮片刮取糞便,置定量板于載玻片上,用兩指壓住定量板的兩端,將刮片上的糞便填滿?祝稳ザ嘤嗉S便。掀起定量板,載玻片上留下一長形糞條,然后在糞條上覆蓋含甘油孔雀綠溶液的玻璃紙條,展平后加壓,使玻璃紙下的糞便鋪成長橢圓形。經(jīng)1 h - 2 h透明后置鏡下計數(shù)。將所得蟲卵數(shù)×24,再乘上糞便性狀系數(shù),即為每克糞便蟲卵數(shù)(egg per gram,EPG)。
淘蟲檢查法 amoying and screening worm method
為了考核驅(qū)蟲效果,常需從糞便中淘取驅(qū)除的蟲體進(jìn)行鑒定與計數(shù)。取患者服藥后24 h - 72 h的全部糞便,加水?dāng)嚢,用篩 [ 375μm(40目)] 或紗布濾出糞渣,經(jīng)水反復(fù)沖洗后,倒在盛有清水的大型玻皿內(nèi)。檢查混雜在糞渣中的蟲體時,應(yīng)在玻皿下襯以黑紙。
鉤蚴培養(yǎng)法 culture method for hookworm larvae
根據(jù)鉤蟲卵內(nèi)幼蟲在適宜條件下可在短時間內(nèi)孵出而設(shè)計的方法。
加冷開水約1mL于潔凈試管內(nèi)(1 cm×10 cm),將濾紙剪成與試管等寬但較試管稍長的T字形紙條,用鉛筆書寫受檢者姓名和編號于橫條部分。取糞便0.2 g~0.4 g,均勻涂抹在紙條上2/3處,再將紙條插入試管,下端浸泡在水中。在20℃~30℃的條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)期間每天沿管壁補(bǔ)充冷開水,以保持水面高度。3d后即可用肉眼或放大鏡觀察試管底部,鉤蚴在水中常作蛇行游動,蟲體透明。
帶絳蟲孕節(jié)檢查法 test for taenia proglottid
絳蟲節(jié)片用清水洗凈,置于兩張載玻片之間,輕輕壓平,對光觀察內(nèi)部結(jié)構(gòu),并根據(jù)子宮分支情況鑒定蟲種。也可用注射器從孕節(jié)后端正中部插入子宮內(nèi)徐徐注射碳素墨水或卡紅,待子宮分支顯現(xiàn)后計數(shù)。
血液涂片檢查法 blood smear test
血液涂片檢查主要是診斷瘧疾、絲蟲病的方法。檢查瘧原蟲常用薄血膜和厚血膜,檢查微絲蚴可用新鮮血片和厚血膜。
排泄物與分泌物檢查
夏科-萊登結(jié)晶 Charcot-Leyden crystals
由嗜酸粒細(xì)胞裂解產(chǎn)物形成的雙尖形、六角形或針樣的結(jié)晶。常見于阿米巴痢疾患者糞便或衛(wèi)氏并殖吸蟲病患者的痰液或病變組織中。
腸檢膠囊法 Entero-test capsule
檢查賈第蟲病的一種實(shí)驗(yàn)診斷方法。囑患者禁食后吞入一特制的裝有尼龍線的膠囊,將線的末端經(jīng)膠囊一端的小孔引出,并固定在受檢者的口外側(cè)。吞下的膠囊在體內(nèi)溶解后,尼龍線松開、伸展,經(jīng)3 h - 4 h可達(dá)十二指腸或空腸,含賈第蟲滋養(yǎng)體的腸液即可黏附于尼龍線上,然后緩慢拉出尼龍線,取其遠(yuǎn)端的黏附物,滴在載玻片上,鏡檢藍(lán)氏賈第鞭毛蟲滋養(yǎng)體。
其他器官組織檢查
NNN培養(yǎng)液 Novy-McNeal-Nicolle medium
用于利什曼原蟲的培養(yǎng)。配制方法:取1.4 g瓊脂、0.6 g氯化鈉、900 mL蒸餾水置燒瓶中加熱熔化、分裝,每試管30 mL。高壓滅菌,待冷卻后加入1 mL去纖維兔血,混勻、斜置,冷卻。再加入0.5 mL洛克氏溶液,4℃冷藏。
杜氏利什曼原蟲培養(yǎng) culture method for Leishmania donovani
培養(yǎng)杜氏利什曼原蟲前鞭毛體的一種方法。在無菌條件下取受檢者骨髓、淋巴結(jié)穿刺液或皮膚刮取物,與0.2 mL洛克液混合,迅速注入NNN培養(yǎng)基或Schneider培養(yǎng)基內(nèi).置22℃~28℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng),10 d--20 d后取試管底部混合液,涂片、鏡檢前鞭毛體。
利什曼素 leishmanin
在無菌條件下,取在NNN培養(yǎng)基中培養(yǎng)10 d~12 d的利什曼原蟲前鞭毛體培養(yǎng)液,倒人離心管內(nèi),以1700g離心5 min,洗滌3次~4次,再用硫柳汞生理鹽水稀釋成濃度為107個/mL前鞭毛體懸液。
免疫學(xué)診斷技術(shù)
皮內(nèi)試驗(yàn) intradermal test;IDT
宿主在寄生蟲變應(yīng)原刺激后,體內(nèi)產(chǎn)生親細(xì)胞性抗體(IgE和IgG4)。當(dāng)其與相應(yīng)抗原結(jié)合后,肥大細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞脫顆粒,釋放生物活性物質(zhì),引起注射抗原的局部皮膚出現(xiàn)皮丘及紅暈,以此可判斷體內(nèi)是否有某種特異性抗體存在。
皮內(nèi)試驗(yàn)用于多種蠕蟲病,如血吸蟲病、肺吸蟲病、姜片吸蟲病、囊尾蚴病、棘球蚴病等的輔助診斷和流行病學(xué)調(diào)查。本法簡單、快速,尤其適用于現(xiàn)場應(yīng)用,但假陽性率較高。
卡松尼皮內(nèi)試驗(yàn) Casoni intradermal test
卡松尼皮膚試驗(yàn) Casoni skin test
卡松尼試驗(yàn) Casoni test
用棘球蚴抗原進(jìn)行的皮內(nèi)試驗(yàn),主要用于包蟲病診斷的初篩。
利什曼素皮內(nèi)試驗(yàn) leishmanin;intractaneous test
蒙氏實(shí)驗(yàn) Montenegro's test
將利什曼素皮內(nèi)注射至受試者前臂曲側(cè)后48 h觀察結(jié)果。注射部位出現(xiàn)直徑大于0.5 cm隆起于皮膚表面的硬結(jié)者為陽性反應(yīng)。
免疫電泳 immunoelectrophoresis
將免疫擴(kuò)散與蛋白質(zhì)凝膠電泳相結(jié)合的一項(xiàng)技術(shù)。事先將抗原在凝膠板中電泳,之后在凝膠槽中加入相應(yīng)抗體,抗原和抗體雙相擴(kuò)散后,在比例合適的位置,產(chǎn)生肉眼可見的弧形沉淀線。該法除可用于某些寄生蟲病的免疫診斷外,還可用于寄生蟲抗原鑒定和檢測免疫血清的滴度。
間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn) indirect haemagglutination test;IHA
以紅細(xì)胞作為可溶性抗原并使之致敏。致敏的紅細(xì)胞與特異性抗體結(jié)合而產(chǎn)生凝集,即為陽性反應(yīng)。
適用于寄生蟲病的輔助診斷和現(xiàn)場流行病學(xué)調(diào)查。用于診斷瘧疾、阿米巴病、弓形蟲病、血吸蟲病、囊尾蚴病、旋毛蟲病、肺吸蟲病和肝吸蟲病等。
間接熒光抗體試驗(yàn) indirect fluorescent antibody method;IFA
用熒光素標(biāo)記第二抗體,可以進(jìn)行多種特異性抗原抗體反應(yīng),即可檢測抗原又可檢測抗體?捎糜诩纳x病的快速診斷、流行病學(xué)調(diào)查和疫情監(jiān)測,還可用于組織切片中抗原定位以及在細(xì)胞和亞細(xì)胞水平觀察和鑒定抗原、抗體和免疫復(fù)合物。主要用于診斷瘧疾、絲蟲病、血吸蟲病、肺吸蟲病、華支睪吸蟲病、棘球蚴病及弓形蟲病。
對流免疫電泳試驗(yàn) counter-immunaoelectrophoresis;CIE
對流免疫電泳試驗(yàn)是以瓊脂或瓊脂糖凝膠為基質(zhì)的一種快速、敏感的電泳技術(shù)。本法可用于血吸蟲病、肺吸蟲病、阿米巴病、賈第蟲病、錐蟲病、棘球蚴病和旋毛蟲病等的血清學(xué)診斷和流行病學(xué)調(diào)查。
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) enzyme-linked immunosorbent assay;ELISA
該試驗(yàn)原理是將抗原或抗體與底物(酶)結(jié)合,使其保持免疫反應(yīng)和酶的活性。把標(biāo)記的抗原或抗體與包被于固相載體上的配體結(jié)合,再使之與相應(yīng)的無色底物作用而顯示顏色,根據(jù)顯色深淺程度目測或用酶標(biāo)儀測定 OD 值判定結(jié)果。本法可用于宿主體液、排泄物和分泌物內(nèi)特異抗體或抗原的檢測。已用于多種寄生蟲感染的診斷和血清流行病學(xué)調(diào)查。
免疫酶染色試驗(yàn) immunoenzymic staining test;IEST
免疫酶染色試驗(yàn)以含寄生蟲病原的組織切片、印片或培養(yǎng)物涂片為固相抗原,當(dāng)其與待測標(biāo)本中特異性抗體結(jié)合后,可再與酶標(biāo)記的第二抗體反應(yīng)形成酶標(biāo)記免疫復(fù)合物,后者可與酶的相應(yīng)底物作用而出現(xiàn)肉眼或光鏡下可見的呈色反應(yīng)。本法適用于血吸蟲病、肺吸蟲病、肝吸蟲病、絲蟲病、囊尾蚴病和弓形蟲病等的診斷和流行病學(xué)調(diào)查。
免疫印跡試驗(yàn) immunobloting technique;ELIB;Western blot
由十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳( SDS-PAGE)、電轉(zhuǎn)印及固相酶免疫試驗(yàn)三項(xiàng)技術(shù)結(jié)合為一體的一種特殊的分析檢測技術(shù)。本法具有高度敏感性和特異性,可用于寄生蟲抗原分析和寄生蟲病的免疫診斷。
弓形蟲染色試驗(yàn) Sabin-Feldman dye test
一種檢測弓形蟲感染的血清學(xué)方法;畹南x體與血清作用后,60%蟲體不被亞甲藍(lán)著色者為陽性,反之為陰性。本方法為經(jīng)典的免疫學(xué)方法,其特異性、敏感性和重復(fù)性均較好。
環(huán)卵沉淀試驗(yàn) circumoval precipitin test;COPT
血吸蟲卵內(nèi)毛蚴分泌的抗原物質(zhì)經(jīng)卵殼微孔滲出后與待檢測血清內(nèi)的特異抗體結(jié)合,在蟲卵周圍形成鏡下可見的帶狀或泡狀免疫復(fù)合物沉淀,即為陽性反應(yīng)。
旋毛蟲環(huán)蚴沉淀實(shí)驗(yàn) circumlarval precipitin test for trichina;CLPT
取50條~100條脫囊的旋毛蟲活幼蟲(凍干幼蟲或空氣干燥幼蟲也可)放人待檢血清中,37℃溫育24 h,如1條以上幼蟲體表出現(xiàn)泡狀或袋狀沉淀附著,即為陽性反應(yīng)。
單克隆抗體 monoclonal antibody;McAb
用經(jīng)特異性抗原刺激的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞雜交、融合后分泌的一種單一的特異性抗體。用于寄生蟲病種株分型與鑒定、蟲體結(jié)構(gòu)與功能分析、免疫病理研究、分析和純化抗原以及制備保護(hù)性疫苗等。利用McAb檢測循環(huán)抗原可診斷瘧疾、弓形蟲病、血吸蟲病、肺吸蟲病、棘球蚴病、絲蟲病。
免疫擴(kuò)散 immunodiffusion
在一定條件下,抗原與抗體在瓊脂凝膠中相遇,在二者含量比例合適時形成肉眼可見的白色沉淀。免疫擴(kuò)散法除可用于某些寄生蟲病的免疫診斷外,還可用于寄生蟲抗原鑒定和檢測免疫血清的滴度。
分子生物學(xué)診斷技術(shù)
DNA探針技術(shù) DNA probe
基因探針技術(shù)
用同位素、生物素、酶或其他半抗原標(biāo)記的特定DNA片段。在其與DNA樣本雜交過程中,借助上述標(biāo)記物可探查出特異性或差異性DNA。目前,DNA探針已用于瘧原蟲、隱孢子蟲、藍(lán)氏賈第鞭毛蟲、錐蟲、巴貝蟲、弓形蟲、絲蟲、血吸蟲、棘球蚴、豬帶絳蟲、肝片吸蟲等蟲種的鑒定和相應(yīng)疾病的診斷。
聚合酶鏈反應(yīng) polymerase chain reacti
PCR技術(shù)
在引物介導(dǎo)下特異性擴(kuò)增DNA的一種技術(shù)。目前,PCR技術(shù)多用于寄生蟲病的基因診斷、分子流行病學(xué)研究和種株鑒定、分析等領(lǐng)域。已應(yīng)用的蟲種包括利什曼原蟲、瘧原蟲、弓形蟲、阿米巴、巴貝蟲、旋毛蟲、錐蟲、隱孢子蟲、藍(lán)氏賈第鞭毛蟲、豬帶絳蟲和絲蟲。
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