
利什曼病的診斷需要廣泛應(yīng)用分子生物學技術(shù)來鑒定利什曼原蟲,比較復雜,專業(yè)人士一直在尋找替代方法。其中,最新的是用納米粒子檢測特定的生物分子。
希臘雅典大學的實驗科學家培養(yǎng)了來自人和動物的不同種類利什曼原蟲的15份分離物。從基因上與利什曼原蟲相關(guān)的病原體以及一些細菌中選了40種陰性對照。
他們用德國迪倫Macherey Nagel公司的Nucleospin組織試劑盒從全部樣本中分離DNA。將美國猶他州鹽湖城Nanopartz公司的金納米粒子(AuNP)與四支寡核苷酸探針結(jié)合,靶向利什曼原蟲的動質(zhì)體微環(huán)DNA。目測試管或用瑞士門內(nèi)多夫市帝肯公司的Infinite M200進行分光光度測量,記錄結(jié)果。如果不存在互補DNA,AuNP探針則在酸環(huán)境下沉淀,使顏色從紅變紫,肉眼就能看到。如果存在目標DNA,溶液仍保持紅色。
如果10微升樣本內(nèi)的利什曼原蟲DNA不少于115納克,該測定能產(chǎn)生一致的陽性結(jié)果,僅需目測試管就可檢測到。因此該方法的最小檢測限規(guī)定為每微升樣本11.5納克目標DNA?芍貜托院涂稍佻F(xiàn)性為100%,參照經(jīng)典的聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法的相對靈敏度與特異性分別為92%和100%。該方法將AuNP與四支單鏈寡核苷酸探針結(jié)合,為檢測利什曼原蟲DNA提供了容易、快速和便宜的方式。這種方法被視為資源貧乏地區(qū)的絕佳診斷解決方案,特別適合用于地方性動物病流行地區(qū)的篩查。
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