
雖然傳統(tǒng)的顯微鏡檢驗和快速診斷檢驗(RDT)適于診斷顯現(xiàn)癥狀的瘧疾感染,但還需要更靈敏的檢驗篩查不顯癥狀的低密度感染。近日,科學(xué)家開發(fā)出一種改進型測定可檢測核糖核酸(RNA)與DNA,從而利用少量血液中RNA拷貝數(shù)高的特點,用一種穩(wěn)定化試劑保存針刺指尖或耳垂所獲少量血液中的核酸,該過程只需很少的樣本處理,且無需冷鏈。
美國馬里蘭大學(xué)醫(yī)學(xué)院的科學(xué)家及其同行收集了緬甸東南部三個鎮(zhèn)的血樣。收集的指血用于現(xiàn)場執(zhí)行韓國龍仁市標(biāo)準(zhǔn)診斷股份有限公司的瘧疾Ag P.f/Pv, RDT,把0.3毫升血放入采集管。用凱杰公司(Qiagen; Valencia, CA, USA)的QIAamp 96 DNA血液試劑盒從200微升血液/穩(wěn)定劑混合物中提取總核酸,但又用50微升緩沖液洗脫。
科學(xué)家開發(fā)了一種逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT- PCR),用于惡性瘧原蟲和間日瘧原蟲18S核糖體RNA基因和核糖體RNA的多重檢測。將仿真現(xiàn)場的樣本保存14天,用樣本保存緩沖液來評估分析靈敏度和特異性。此外又用RDT和超靈敏RT-PCR檢驗了緬甸東南部的1,750份現(xiàn)場樣本,后者在羅氏診斷公司(Indianapolis, IN, USA)的Lightcycler 96或480實時PCR儀上運行。
在仿真現(xiàn)場條件下確定檢測限(LoD),惡性瘧原蟲的檢測限是16條寄生蟲/毫升以下,間日瘧原蟲的檢測限是19.7份拷貝/微升(用質(zhì)粒替代物),大約是RDT的萬分之一。超靈敏RT-PCR和RDT都成功評估的1,739份樣本中,RDT只判兩份為陽性,而用超靈敏RT-PCR測得24份惡性瘧原蟲陽性、108份間日瘧原蟲陽性以及127份或為間日瘧原蟲陽性或為惡性瘧原蟲陽性。
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