亚洲精品久久无码2021,偷拍亚洲另类无码专区制服,亚洲欧美性都花花世界,国产熟女的精品视频大全,色偷偷2025免费视频观看,撅着大腚SXMV色香视频

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群引發(fā)的一種慢性傳染病，主要通過空氣傳播。肺結(jié)核的主要臨床癥狀包括咳嗽、咳痰，可能伴有低熱、盜汗、消瘦和虛弱等全身癥狀。除肺部外，結(jié)核病還可侵犯肝、腎、腦和淋巴結(jié)等其他器官，成為全球成年人死于傳染病的主要原因。及時(shí)的診斷和治療對控制疫情和提高治愈率至關(guān)重要。以下將簡要介紹結(jié)核病的常見診斷方法。

1、微生物學(xué)檢測

（1）抗酸染色涂片法：結(jié)核分枝桿菌的細(xì)胞壁中含有蠟質(zhì)成分，對酸性染料具有抵抗性。經(jīng)過特定染色后，結(jié)核分枝桿菌呈紅色，背景則呈藍(lán)色。

（2）結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)法：該方法準(zhǔn)確性高，但培養(yǎng)周期長且對實(shí)驗(yàn)室條件要求較高，通常與其他檢測方法結(jié)合使用。

2、免疫學(xué)檢測

（1）結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn) （TST）：感染結(jié)核分枝桿菌后，免疫系統(tǒng)會(huì)產(chǎn)生特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)。將結(jié)核菌素（PDD）以小劑量皮內(nèi)注射至個(gè)體前臂內(nèi)側(cè)，如果對結(jié)核菌素敏感，注射部位將出現(xiàn)紅腫和硬結(jié)。

（2）γ干擾素釋放試驗(yàn)（IGRA）：IGRA基于免疫系統(tǒng)對結(jié)核分枝桿菌特異性抗原的反應(yīng)。當(dāng)個(gè)體感染結(jié)核分枝桿菌時(shí)，體內(nèi)的T細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生干擾素-γ（IFN-γ）。IGRA通過測量這些T細(xì)胞在接觸特定抗原后釋放的IFN-γ來判斷是否曾感染過結(jié)核分枝桿菌。

（3）結(jié)核桿菌 IgG 抗體檢測：感染結(jié)核分枝桿菌后，免疫系統(tǒng)會(huì)產(chǎn)生特異性IgG抗體。通過檢測血清中IgG抗體的水平，可以推測個(gè)體是否曾感染過結(jié)核分枝桿菌。

3、影像學(xué)檢測

胸部X光：是影像學(xué)中最常用的初步篩查工具，能夠顯示肺部的異常表現(xiàn)，如肺結(jié)核的病灶、浸潤、空洞等。

4、分子診斷技術(shù)

Xpert MTB/RIF：這是一種針對結(jié)核分枝桿菌（MTB）和利福平耐藥性（RIF）的自動(dòng)化分子檢測方法，采用巢式實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）擴(kuò)增MTB特異性序列rpoB基因，并通過分子信標(biāo)檢測利福平耐藥決定區(qū)的突變。為進(jìn)一步提高檢測的敏感度，美國Cepheid公司推出了第二代系統(tǒng)——Xpert Ultra。

Truenat技術(shù)：Truenat技術(shù)是一項(xiàng)基于微量逆轉(zhuǎn)錄PCR和核酸雜交芯片相結(jié)合的結(jié)核病及耐藥結(jié)核病分子檢測技術(shù)，包括Truenat MTB、MTB Plus、MTB-RIF Dx 即時(shí)檢測平臺(tái)，是一種快速、便攜且低成本的結(jié)核病及耐藥結(jié)核病分子檢測方法，適合在基礎(chǔ)設(shè)施有限的地區(qū)使用。

線性探針技術(shù)(line probe assay，LPA): 該技術(shù)利用生物素化引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物與固定于膜上的特異性寡核苷酸探針雜交，根據(jù)酶聯(lián)免疫比色法進(jìn)行結(jié)果解釋。它不僅可用于MTB檢測，還可用于藥物耐藥突變檢測，應(yīng)用平臺(tái)包括GenoType MTBDRplus、GenoType MTBDRsl和Genoscholar NTM+MDRTB。

基因測序：二代測序（NGS）不僅能夠快速識(shí)別結(jié)核分枝桿菌，還可以檢測其對多種抗結(jié)核藥物的耐藥性。全基因組測序（WGS）能夠提供詳細(xì)的耐藥機(jī)制分析和傳播特征，設(shè)備成本高和技術(shù)要求復(fù)雜。

質(zhì)譜技術(shù)：是一種通過‌電場和‌磁場將運(yùn)動(dòng)的離子按質(zhì)荷比分離并進(jìn)行檢測的方法，可以用于非MTB和MTB的菌種鑒定，具有分辨率高、快速、準(zhǔn)確、需要菌量少的優(yōu)點(diǎn)。

等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)：該方法可以在恒定溫度下擴(kuò)增特定的核酸序列，能夠在短時(shí)間內(nèi)準(zhǔn)確檢測結(jié)核分枝桿菌及其耐藥性，提升了結(jié)核病的早期診斷效率。

其他分子檢測技術(shù)：關(guān)于結(jié)核桿菌基因及相關(guān)標(biāo)志物的創(chuàng)新性檢測技術(shù)層出不窮，這些技術(shù)在結(jié)核病的早期診斷和監(jiān)測中展現(xiàn)出重要的應(yīng)用潛力。以下是幾種新興技術(shù)，它們?yōu)榻Y(jié)核病的快速檢測提供了創(chuàng)新的解決方案：

美國佛羅里達(dá)中央大學(xué)Yulia V. Gerasimova團(tuán)隊(duì)利用分裂探針和視覺信號(hào)放大級(jí)聯(lián)，實(shí)現(xiàn)了對耐藥和藥敏結(jié)核分枝桿菌（MTC）基因型的區(qū)分。脫氧核酶（dz）序列被分為兩個(gè)片段，形成分裂的Dz（sDz）鏈。底物結(jié)合臂識(shí)別抑制PDz結(jié)構(gòu)（IPDz）。在特定核酸靶標(biāo)存在時(shí)，鏈S和鏈U與靶標(biāo)雜交，形成Dz催化核心，裂解IPDz并釋放PDz。PDz折疊成G-四鏈體，對血紅蛋白具有親和力。hemin-PDz全酶促進(jìn)單電子轉(zhuǎn)移反應(yīng)，將無色的（ABTS）轉(zhuǎn)化為可視化的藍(lán)綠自由基陽離子（ABTS+）。特定靶分子觸發(fā)多個(gè)PDz分子的釋放，放大信號(hào)。結(jié)合等溫核酸序列擴(kuò)增，該方法可在不到2小時(shí)內(nèi)檢測到從NASBA提取的0.1 pg和10 pg總RNA中產(chǎn)生的16S rRNA和katG mRNA擴(kuò)增子，并產(chǎn)生可見信號(hào)。[1]

圖1 sDz/PDz級(jí)聯(lián)系統(tǒng)的設(shè)計(jì)原理

斯坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)院Matthew Bogyo教授設(shè)計(jì)了一種檢測Mtb的新型診斷探針—快速、發(fā)光、廉價(jià)的Hip1 ( FLASH )傳感器，可用于結(jié)核分枝桿菌蛋白激酶Hip 1的檢測，并且可以區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。Hip1是一種細(xì)胞被膜相關(guān)的絲氨酸蛋白酶，對Mtb毒力及其在巨噬細(xì)胞中的存活至關(guān)重要。Hip1切割Mtb蛋白GroEL2，有助于抑制早期巨噬細(xì)胞的促炎反應(yīng)。該團(tuán)隊(duì)將Hip 1的選擇性四肽底物通過中間連接子對氨基芐醇與苯氧基-二氧雜環(huán)丁烷發(fā)光團(tuán)偶聯(lián)。四肽底物對結(jié)核分枝桿菌蛋白激酶Hip 1有較高的選擇性，通過酶催化裂解。在酶切后，苯胺連接子發(fā)生自發(fā)消除，釋放出活化的苯氧基二氧雜環(huán)丁烷發(fā)光體。隨后的化學(xué)激發(fā)和衰減過程導(dǎo)致了光的自發(fā)產(chǎn)生。活的Mtb表達(dá)有活性的Hip1，它處理探針產(chǎn)生光。用靈敏的光度儀測量發(fā)射光，并隨時(shí)間積分，以產(chǎn)生總的發(fā)光信號(hào)[2]。

圖2 快速發(fā)光傳感器Hip1 （FLASH）的設(shè)計(jì)原理

南卡羅萊納大學(xué)劉暢教授通過Click反應(yīng)將抗原轉(zhuǎn)化為DNA探針并定量其特征信號(hào)，展示了一種具有多種擴(kuò)增機(jī)制的納米孔檢測方法，可達(dá)原子摩爾水平的檢測限，從而可以定量人血清中循環(huán)結(jié)核分枝桿菌（Mtb）抗原ESAT-6/CFP-10復(fù)合物。首先捕獲抗體修飾的dynabeads從血清樣品中免疫沉淀ESAT-6/CFP-10抗原復(fù)合物，然后特異性結(jié)合檢測抗體修飾的CuO納米顆粒，形成夾心結(jié)構(gòu)。接著，通過磁性分離夾心結(jié)構(gòu)，鹽酸釋放Cu+以催化DNA-炔烴（DNA-A）與疊氮基金剛烷（AA）之間的點(diǎn)擊反應(yīng)，擴(kuò)增形成DNA-AA。最后，與CB[6]的主客體相互作用形成DNA-AA@CB[6]探針。ssDNA探針通過α溶血素（α-HL）納米孔的產(chǎn)生了高度特征的特征信號(hào)，與DNA-A和DNA-AA的非特異性信號(hào)明顯區(qū)分開來。將納米孔對ssDNA的單分子靈敏度與催化擴(kuò)增相結(jié)合，產(chǎn)生一種特征信號(hào)模式，作為一種通用的生物傳感策略用于準(zhǔn)確檢測和定量。[3]

圖3 ESAT-6/CFP-10抗原復(fù)合物定量納米孔法示意圖

四川大學(xué)華西醫(yī)院實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)科應(yīng)斌武教授團(tuán)隊(duì)報(bào)告了一種高靈敏度的視覺免疫分析法，用于檢測尿液樣本中的脂阿拉伯甘露聚糖（LAM）對結(jié)核病的診斷。首先在反應(yīng)孔底部形成雙抗體夾心復(fù)合物，特異性識(shí)別捕獲LAM。然后，鏈霉親和素（SA）加入孔中與生物素標(biāo)記的二抗結(jié)合。然后生物素標(biāo)記的T30探針與SA特異性結(jié)合。LAM濃度與上清液中游離T30的濃度呈負(fù)相關(guān)。上清液轉(zhuǎn)移到離心管中進(jìn)行下一階段反應(yīng)，通過原位合成銅納米粒子（Cu NPs）進(jìn)行信號(hào)放大。Cu²⁺與胸腺嘧啶（T）絡(luò)合后，被抗壞血酸還原生成Cu NPs，生成量與游離T30濃度正相關(guān)，消耗游離Cu²⁺。最后，鈣黃綠素和量子點(diǎn)（QDs）通過競爭反應(yīng)選擇性識(shí)別Cu²⁺和Cu NPs。反應(yīng)液中Cu²⁺/Cu NPs濃度比隨LAM濃度升高而增加，導(dǎo)致兩種信號(hào)分子的熒光強(qiáng)度減弱，可視化條帶擴(kuò)散長度縮短。[4]

圖4 尿液樣本中LAM的可視化免疫分析示意圖

華東理工大學(xué)張志斌團(tuán)隊(duì)結(jié)合磁珠優(yōu)越的分離能力和雜交鏈反應(yīng)（HCR）優(yōu)良的信號(hào)放大能力，構(gòu)建了一種低成本、無酶、靈敏的MTB IS6110基因序列（MTB DNA）檢測平臺(tái)。MTB DNA與H1偶聯(lián)磁珠（MBs-H1）雜交破壞H1的發(fā)夾結(jié)構(gòu)，引發(fā)HCR反應(yīng)。在最佳條件下，該方法對MTB DNA具有良好的熒光響應(yīng)，最低檢測濃度低至10 pM。[5]

圖5 基于HCR和MBs的MTB檢測概念示意圖

四川大學(xué)華西醫(yī)院實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)科陳飄飄團(tuán)隊(duì)建立了一種同時(shí)分析結(jié)核病患者血液樣本中IP-10和IFN-γ的策略，利用納米材料的選擇性鑒定和無酶核酸擴(kuò)增。以IP-10為例，合成IP-10適配體-P2 dsDNA特異性識(shí)別溶液中的IP-10，從中釋放P2。胸腺嘧啶堿基在HP2末端與Hg²⁺反應(yīng)，形成T-Hg²⁺-T發(fā)夾結(jié)構(gòu)。P2通過HP2環(huán)區(qū)識(shí)別，形成P2-HP2 dsDNA，Hg²⁺同時(shí)釋放到混合物中并通過CDs檢測。P2-HP2 dsDNA可被輔助環(huán)2區(qū)識(shí)別，釋放P2參與CHA循環(huán)擴(kuò)增，產(chǎn)生大量HP2-helper 2 dsDNA，釋放更多Hg²⁺到溶液中。以IFN-γ適配體序列為基礎(chǔ)，設(shè)計(jì)CAg⁺- C發(fā)夾結(jié)構(gòu)的P1、輔助鏈1和HP1。溶液中的IFN-γ觸發(fā)CHA反應(yīng)，釋放Ag⁺。Ag⁺和Hg²⁺分別被CdTe量子點(diǎn)和CDs選擇性識(shí)別，形成關(guān)斷信號(hào)的報(bào)告模式。而非結(jié)核病患者沒有這種反應(yīng)。[6]

圖6 通過選擇性識(shí)別和CHA同時(shí)均勻敏感熒光定量IP-10和IFN-γ

湖南大學(xué)何鳳姣團(tuán)隊(duì)提出了一種檢測結(jié)核分枝桿菌菌株H37Rv的電化學(xué)傳感。該傳感器包含一個(gè)H37Rv適配體和金納米顆粒修飾的寡核苷酸（AuNPs-DNA）。該實(shí)驗(yàn)室篩選H37Rv適體作為識(shí)別探針。采用多通道串聯(lián)壓電石英晶體（MSPQC）系統(tǒng)檢測H37Rv存在下AuNPs-DNA介導(dǎo)的頻移變化。設(shè)計(jì)了三種金納米粒子修飾的寡核苷酸。這些寡核苷酸分別含有12、12和13個(gè)堿基與37-nt H37Rv適配體雜交。通過Au-S鍵將H37Rv適配體固定在金電極表面。然后通過將適體與設(shè)計(jì)的三個(gè)AuNPs-DNA序列雜交形成導(dǎo)電層。當(dāng)H37Rv存在時(shí)，它特異性地與適體結(jié)合，導(dǎo)致AuNPs-DNA與電極分離。導(dǎo)電層因此被適體和細(xì)菌的非導(dǎo)電復(fù)合物所取代。這些變化由MSPQC系統(tǒng)監(jiān)測。該傳感器快速、特異、靈敏，檢測時(shí)間為2 h，檢出限為100 cfu/mL。[7]

參考文獻(xiàn)

[1]  Dhar B C, Reed A J, Mitra S, et al. Cascade of deoxyribozymes for the colorimetric analysis of drug resistance in Mycobacterium tuberculosis[J]. Biosensors and Bioelectronics, 2020, 165: 112385.

[2]  Babin B M, Fernandez-Cuervo G, Sheng J, et al. Chemiluminescent Protease Probe for Rapid, Sensitive, and Inexpensive Detection of Live Mycobacterium tuberculosis[J]. ACS central science, 2021, 7(5): 803-814.

[3]  Wang X, Wei X, Van Der Zalm M M, et al. Quantitation of Circulating Mycobacterium tuberculosis Antigens by Nanopore Biosensing in Children Evaluated for Pulmonary Tuberculosis in South Africa[J]. ACS Nano, 2023, 17(21): 21093-21104.

[4]  Chen P, Meng Y, Liu T, et al. Sensitive Urine Immunoassay for Visualization of Lipoarabinomannan for Noninvasive Tuberculosis Diagnosis[J]. ACS Nano, 2023, 17(7): 6998-7006.

[5]  Chu Z J, Xiao S J, Liu Y H, et al. Rapid and sensitive detection of the IS6110 gene sequences of Mycobacterium tuberculosis based on hybridization chain reaction and reusable magnetic particles[J]. Sensors and Actuators B: Chemical, 2019, 282: 904-909.

[6]  Shi T, Jiang P, Peng W, et al. Nucleic Acid and Nanomaterial Synergistic Amplification Enables Dual Targets of Ultrasensitive Fluorescence Quantification to Improve the Efficacy of Clinical Tuberculosis Diagnosis[J]. ACS Applied Materials & Interfaces, 2024, 16(12): 14510-14519.

[7]  Zhang X, Feng Y, Duan S, et al. Mycobacterium tuberculosis strain H37Rv Electrochemical Sensor Mediated by Aptamer and AuNPs–DNA[J]. ACS Sensors, 2019, 4(4): 849-855.