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一、高危型HPV持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)展的關(guān)鍵

人乳頭瘤病毒（Human Papilloma virus，HPV）是一種小型無包膜的雙鏈環(huán)狀DNA病毒。HPV具有嗜上皮特性，可以感染人體皮膚黏膜任何部位，引起皮膚黏膜角質(zhì)形成細(xì)胞的過度增殖，HPV與多種癌癥的發(fā)生有關(guān)。

HPV基因組序列存在10%以上的不同，即為不同的基因型別。目前已發(fā)現(xiàn)超過200種型別的HPV，按HPV生物學(xué)性和致癌性，可將HPV為低危型（LR-HPV）與高危型（HR-HPV）。

LR-HPV會引起人表皮良性贅生物（如尖銳濕疣、尋常疣等），HR- HPV會引起宮頸上皮病變和陰道病變等，更可進(jìn)展為皮膚鱗癌、生殖器惡性腫瘤（如子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、肛門癌、陰莖癌、頭頸部癌等）。

研究顯示，有性行為的男性和女性一生中感染HPV的機(jī)率高達(dá)85%-90%。

大部分感染可以被自身清除，小部分患者高危型HPV持續(xù)感染，可導(dǎo)致病變并最終進(jìn)展為子宮頸癌。

HPV感染宮頸上皮后，因其基因型別不同、是否持續(xù)感染及持續(xù)感染時(shí)間不同，其致病風(fēng)險(xiǎn)也顯著不同。因此，對HPV進(jìn)行分型檢測并明確是否存在持續(xù)感染具有重要的臨床意義。

二、我國宮頸癌篩查現(xiàn)狀與WHO要求差距甚遠(yuǎn)

1、宮頸癌可控可防

世界衛(wèi)生組織（WHO）推薦宮頸癌防控策略：

2、WHO：加速消除宮頸癌的全球計(jì)劃

一個(gè)愿景：全世界范圍內(nèi)宮頸癌作為公共衛(wèi)生問題被消除。

一個(gè)閾值：作為公共衛(wèi)生問題消除宮頸癌的目的是發(fā)病率低于4/10萬（中國目前11.3/10萬）。

一個(gè)目標(biāo)：在消除宮頸癌方面，2030年達(dá)到90-70-90的目標(biāo)。

3、Golbocan2020：我國是子宮頸癌第二大國

新發(fā)和死亡病例分別占全球18%和17%，僅次于印度 ¹

圖源：Globocan：國際癌癥研究中心(IARC)統(tǒng)計(jì)全球185個(gè)國家/地區(qū)的36種癌癥發(fā)病率、死亡率以及癌癥發(fā)展趨勢等相關(guān)數(shù)據(jù)的數(shù)據(jù)庫；ICO: Information Centre on HPV and Cancer.

4、中國子宮頸癌女性的高危型HPV呈現(xiàn)多樣性

WHO/ICO（世界衛(wèi)生組織/全球HPV信息中心）：中國人HPV高危型別前5位：

16、52、58、33、18

圖源：ICO/IARC Information Centre on HPV and Cancer (HPV Information Centre). Human Papillomavirus and Related Diseases in China.²

上海瑞金醫(yī)院58883例宮頸脫落細(xì)胞高級別病變HPV型別的感染率前五位：

16、52、58、66、56

圖源：2017年至2020年上海地區(qū)婦女宮頸脫落細(xì)胞 HPV 感染亞型調(diào)查³

三、宮頸癌篩查新趨勢：HPV全分型檢測

從HC2檢測到L1 DNA檢測，再到HPV E6/E7 基因分型檢測，HPV核酸檢測技術(shù)的發(fā)展為宮頸癌篩查領(lǐng)域帶來了里程碑式的變革。

以致癌基因（E6/E7）為靶點(diǎn)的檢測產(chǎn)品上市，標(biāo)志著宮頸癌的篩查將能夠避免晚期病變患者因L1丟失而造成漏檢，且全分型檢測對于中高危型別持續(xù)感染的癌變風(fēng)險(xiǎn)系數(shù)提供了更有價(jià)值的臨床評估手段。

以E6/E7 DNA為靶點(diǎn)的25種HPV全分型檢測解決方案，采用多重 PCR 和毛細(xì)電泳技術(shù)，針對 HPV 基因組的早期表達(dá)基因 E6、E7設(shè)計(jì)特異性引物，并對整個(gè)引物擴(kuò)增體系進(jìn)行優(yōu)化，確保每一組引物只能特異性擴(kuò)增一種HPV型別或內(nèi)參。在反轉(zhuǎn)錄階段中，由特異性反向引物與相應(yīng)模板RNA結(jié)合進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，得到反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物（cDNA）。在PCR擴(kuò)增反應(yīng)階段中，特異性的正向引物和反向引物以DNA或cDNA為模板進(jìn)行多模板擴(kuò)增進(jìn)而產(chǎn)生大量的PCR產(chǎn)物，不同型別的PCR產(chǎn)物長度不同。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)過毛細(xì)電泳分離，根據(jù)特異性擴(kuò)增片段長度的不同在一次檢測中對 25 種 HPV 型別同步進(jìn)行分型。

圖：多重?zé)晒釶CR毛細(xì)電泳片段分析技術(shù)原理¹

多重?zé)晒釶CR毛細(xì)電泳片段分析技術(shù)具有靈敏度和特異性高、通量高、重復(fù)性好等優(yōu)勢，已被應(yīng)用于多個(gè)研究領(lǐng)域，該技術(shù)在HPV檢測中，涵蓋18種中高危型和7種常見可引起尖銳濕疣的低危型，助力加速消除子宮頸癌全球戰(zhàn)略，為適齡婦女提供宮頸癌篩查服務(wù)，促進(jìn)宮頸癌早診早治，提高婦女健康水平。

四、基于CE進(jìn)行HPV檢測的實(shí)驗(yàn)流程

1、以致癌基因 E6/E7 DNA為檢測靶點(diǎn)，相比L1減少約10%高級別病變中的漏檢

2013年于《歐洲婦產(chǎn)科學(xué)和生殖生物學(xué)》上發(fā)布的《宮頸癌癥篩查：應(yīng)使用哪種HPV檢測，L1或E6/E7？》研究綜述中提到：

在宮頸從低級別病變發(fā)展為高級別病變或浸潤性宮頸癌的過程中，HPV基因組會發(fā)生整合。在整合的過程中，L1基因會丟失，但E6/E7基因始終存在。如果HPV病毒基因組發(fā)生完全整合，那么以L1基因作為靶點(diǎn)的HPV檢測方法會漏檢宮頸癌/癌前病變；而以E6/E7基因作為靶點(diǎn)的HPV檢測方法不會造成漏檢。

圖源：Cervical cancer screening：which HPV test should be used-L1 or E6/E7？⁴

研究發(fā)現(xiàn)，宮頸上皮細(xì)胞從低級別病變發(fā)展為高級別病變或癌變的過程中，HPV 基因組通常會發(fā)生整合，整合過程中，L1 DNA可能丟失，但E6/E7 DNA持續(xù)存在。

圖源：The natural history of cervical HPV infection: unresolved issues⁵

2、PCR+毛細(xì)管電泳

檢測樣本完成核酸自動(dòng)化提取后，進(jìn)行反應(yīng)試劑配制，經(jīng)過普通PCR反應(yīng)，最后進(jìn)行毛細(xì)管電泳儀分析。

CE平臺

海爾施基因旗下多款自主研發(fā)的CE平臺，實(shí)驗(yàn)室用戶可根據(jù)不同的檢測通量及功能需求進(jìn)行配置。CE平臺基于毛細(xì)管電泳技術(shù)，具有Sanger測序和片段分析的功能，用于對樣本中DNA或RNA進(jìn)行分析，可應(yīng)用于臨床診斷、口岸檢疫、傳染病監(jiān)測、農(nóng)業(yè)育種、藥物研發(fā)等領(lǐng)域，向用戶提供精準(zhǔn)的檢測結(jié)果。

Sanger測序儀兩大功能

結(jié)果判讀

· 針對 HPV 基因組的早期表達(dá)基因 E6、E7、E1 設(shè)計(jì)特異性引物，對不同 HPV 型別的基因進(jìn)行特異性擴(kuò)增及毛細(xì)電泳分離，根據(jù)特異性擴(kuò)增片段長度的不同在一次檢測中對 25 種 HPV 型別同步進(jìn)行分型。

· 雙重質(zhì)控，保障實(shí)驗(yàn)過程和樣本有效性。

一項(xiàng)研究選取宮頸炎患者的宮頸脫落細(xì)胞2293份，采用多重PCR毛細(xì)管電泳技術(shù)對HPVE6/E7 DNA進(jìn)行分型，包括18 種高危型別和7種低危型別，分析25種基因型的流行病學(xué)特點(diǎn)。結(jié)果顯示2293份樣本中共檢出HPV感染793份，總感染率為34.58%，感染率以＜20 歲組最高；單一型別感染率為66.46%，多重型別感染率為33.54%；高危型HPV占總基因型的81.77%，前5位高危型HPV是HPV52、HPV58、HPV16、HPV53、HPV51，研究表明在受檢宮頸炎患者中以高危型HPV52型感染為主，多重感染的患者以二重感染為主。⁶

參考文獻(xiàn)

[1] Vaccine前沿丨一文解讀HPV作用機(jī)制與最新動(dòng)態(tài)�。╤ttps://mp.weixin.qq.com/s/SDNherq3DINMauZ5ARzy4w）

[2] Bruni L, Albero G, Serrano B, Mena M, Collado JJ, Gómez D, Muñoz J, Bosch FX, de Sanjosé S. ICO/IARC Information Centre on HPV and Cancer (HPV Information Centre). Human Papillomavirus and Related Diseases in China. Summary Report 22 October 2021.

[3] 孟俊, 許嘯聲,陸一一, 范臻佳,蔡剛.2017年至2020年上海地區(qū)婦女宮頸脫落細(xì)胞 HPV 感染亞型調(diào)查分析[J].診斷學(xué)理論與實(shí)踐, 2021,20(6):567-571.

[4] W.A.A. Tjalma et,al. Cervical cancer screening：which HPV test should be used-L1 or E6/E7？European Journal of Obstetrics & Gynecology and Reproductive BioLogy170(2013)45-46.

[5] Woodman C B, Collins S, Y oung L S, et al. The natural history of cervical HPV infection: unresolved issues[J]. Nature Reviews Cancer, 2007, 7(1): 11-22.

[6] 張婷,李蒙佳,陳瑛,等.溫嶺市宮頸炎患者HPV E6/E7 DNA基因分型檢測及分子流行病學(xué)調(diào)查[J].全科醫(yī)學(xué)臨床與教育,2022,20(04):302-305.DOI:10.13558/j.cnki.issn1672-3686.2022.004.005.

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