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什么是FISH

熒光原位雜交的英文名稱為 Fluorescence in situ hybridization，簡寫為FISH，也有學(xué)者通俗形象的稱之為“釣魚”技術(shù)。

從原理來看，其是采用一段已知基因片段帶上熒光標(biāo)記作為探針（探針作為“魚餌”），將這種探針鋪在細(xì)胞或組織樣本上進(jìn)行反應(yīng)。每一種探針的 DNA 序列和待檢測(cè)樣本中的指定 DNA 靶位點(diǎn)序列的堿基如果是互補(bǔ)的，就能進(jìn)行特異性結(jié)合（結(jié)合的狀態(tài)就像是“魚兒上鉤”的過程），通過熒光顯微鏡就能在不破壞染色體或細(xì)胞結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上觀測(cè)到熒光信號(hào)在靶點(diǎn)的位置、大小及數(shù)量，從而判斷被檢測(cè) DNA 序列的缺失、擴(kuò)增及易位等結(jié)果，達(dá)到檢測(cè)細(xì)胞、組織樣本中的染色體或基因異常目的[1]。

圖1  FISH技術(shù)原理圖

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FISH技術(shù)的主要應(yīng)用

 FISH技術(shù)可對(duì)待測(cè)標(biāo)本DNA序列進(jìn)行定位、定性和定量分析，是遺傳學(xué)異常的主要檢測(cè)手段之一。相較于核型分析，F(xiàn)ISH技術(shù)具有快速、靈敏度高及特異性強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)，目前在血液腫瘤中應(yīng)用于以下幾個(gè)方面^[2]：

1.診斷分型

根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）第五版造血與淋巴組織腫瘤中的分類及建議，血液腫瘤診斷分型的主要依據(jù)是遺傳學(xué)改變，如骨髓增生異常性腫瘤（MDS）、多發(fā)性骨髓瘤（MM）、急性白血�。ˋL）、慢性粒細(xì)胞白血�。–ML）、淋巴瘤、T幼淋巴細(xì)胞白血�。═⁃PLL）以及其他特定染色體異常如慢性嗜酸性粒細(xì)胞白血病的del（4））（q1212）、伯基特淋巴瘤的t（8；14）（q24;23）、急性淋巴細(xì)胞白血病中的t（12；21）（p13;q22）等均需要借助FISH檢測(cè)關(guān)鍵的遺傳學(xué)異常才能精準(zhǔn)分型。

2.預(yù)后分層

 世界衛(wèi)生組織（WHO）、美國國立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)（NCCN）指南已提出了基于遺傳學(xué)異常的預(yù)后分層／評(píng)分體系，如急性髓系白血病檢出PML/RARα融合基因等特殊基因，是一種預(yù)后良好的提示；急性淋巴細(xì)胞白血病檢出 BCR-ABL 融合基因，則是預(yù)后不良的標(biāo)志；多發(fā)性骨髓瘤如果有 1q21 擴(kuò)增、p53 缺失以及 IGH/FGFR3、IGH/MAF 融合基因陽性的話，提示預(yù)后不良，而 IGH/CCND1 則相對(duì)較好；AML伴DEK::NUP214融合患者一般預(yù)后不良等等。因此，F(xiàn)ISH檢測(cè)在血液腫瘤的預(yù)后評(píng)估中發(fā)揮著不可替代的作用。

3.指導(dǎo)治療

血液腫瘤通過治療獲得療效后，腫瘤細(xì)胞顯著減少，F(xiàn)ISH 檢測(cè)到原有異常的拷貝數(shù)也會(huì)相應(yīng)下降、甚至轉(zhuǎn)陰。通過檢測(cè)治療后疾病標(biāo)志基因的下降程度或是否轉(zhuǎn)陰，可以評(píng)估治療的療效。如慢性粒細(xì)胞白血病可以監(jiān)測(cè) BCR-ABL 融合基因，急性早幼粒細(xì)胞白血病可以監(jiān)測(cè) PML/RARα融合基因，慢性嗜酸性粒細(xì)胞白血病是新版WHO分類中伴PDGFRA重排髓系和淋系腫瘤中最常見的疾病。部分甲磺酸伊馬替尼治療有效的CEL患者，藥物似乎是針對(duì)FIP1L1-PDGFRA融合基因形成的融合酪氨酸激酶。該基因是染色體4q12帶內(nèi)一種800kbp隱蔽的中間缺失的產(chǎn)物，在40%～60％CEL患者中存在。因此鑒定這種染色體重排對(duì)于這種疾病的治療具有重要意義。由于常規(guī)細(xì)胞遺傳學(xué)分析不能觀察到亞微觀的del（4q）。富半胱氨酸疏水區(qū)2（cysteine-rich hydrophobic domain 2，CHIC2）位于帶4q12上FIP1L1與PDGFRA基因座之間，用該基因的缺失作為FIP1L1-PDGFRA融合指標(biāo)是FISH（FIP1L1-PDGFRA融合基因的FISH探針）檢測(cè)這種重排的有效方法。

備注：來源于參考文獻(xiàn)^[2]

 熒光原位雜交技術(shù)因具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、定位明確及結(jié)果客觀等優(yōu)點(diǎn)，在臨床上還可應(yīng)用于產(chǎn)前染色體數(shù)目檢測(cè)、實(shí)體腫瘤基因檢測(cè)等方面，擔(dān)負(fù)著輔助診斷和指導(dǎo)臨床用藥的重任[3-5]�？偟膩碚f，F(xiàn)ISH技術(shù)在基因診斷、腫瘤遺傳、病毒感染等方面都發(fā)揮了重要作用，為臨床提供了有力價(jià)值。

參考文獻(xiàn)：

[1]Bayani J, Squire JA. Fluorescence in situ Hybridization (FISH). Curr Protoc Cell Biol. 2004;Chapter 22:.doi:10.1002/0471143030.cb2204s23

[2]中國抗癌協(xié)會(huì)血液病轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會(huì)，中國老年醫(yī)學(xué)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)，中華醫(yī)學(xué)會(huì)血液學(xué)分會(huì). 熒光原位雜交技術(shù)在血液腫瘤中的應(yīng)用規(guī)范（2024年版）［J］.白血病·淋巴瘤，2024，33（4）：193⁃198. DOI：10.3760/cma.j.cn115356⁃20231124⁃00083.