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凝血酶原時(shí)間（PT）、活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）和纖維蛋白原（FIB）測(cè)定是常見的凝血試驗(yàn)，抗凝血酶III（ATIII）是體內(nèi)主要的抗凝蛋白，是凝血酶、因子 Xa 和其他凝血酶的主要抑制劑；這些指標(biāo)可用于評(píng)估凝血和抗凝系統(tǒng)的病理變化。而在實(shí)驗(yàn)室測(cè)試過(guò)程，一般分為三個(gè)階段，即分析前、分析中和分析后階段。影響凝血試驗(yàn)結(jié)果的主要分析前變量包括采樣技術(shù)、抽取順序、抗凝劑的類型和濃度、血細(xì)胞比容、采樣管的填充狀態(tài)、運(yùn)輸、離心、溫度、采集和檢測(cè)之間的時(shí)間間隔等^[1]。本次實(shí)驗(yàn)旨在探究凝血試驗(yàn)標(biāo)本在室溫下存放的時(shí)間長(zhǎng)短對(duì)于上述4項(xiàng)凝血試驗(yàn)的結(jié)果的影響。

普通樣本選擇自2023年11月29日在本院抽血的6名患者（樣本1~樣本6），每例標(biāo)本分別進(jìn)行APTT、PT、FIB、ATIII檢測(cè)。第一次檢測(cè)控制在采集時(shí)間2小時(shí)（H）以內(nèi)，此后分別在距離標(biāo)本采集4H，8H，12H，24H進(jìn)行上述凝血檢測(cè)，記錄結(jié)果。此外，針對(duì)PT和APTT，另選4份應(yīng)用了抗凝藥物的患者樣本（樣本7~樣本10），其中樣本7使用阿加曲班，樣本8使用低分子肝素（LMWH），樣本9、樣本10均為使用普通肝素（UFH）。

儀器和試劑采用STA-R MAX血凝儀及其配套試劑，所有樣本在采集后2H內(nèi)完成離心（2000g Х10min），樣本全程常溫（20~25℃）放置。為了避免樣本長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中導(dǎo)致血漿水分蒸發(fā)，影響結(jié)果[2]，所有檢測(cè)都在保持樣本帽蓋緊的狀態(tài)下進(jìn)行（使用儀器的穿刺針進(jìn)行檢測(cè)）。實(shí)驗(yàn)完成后，我們將記錄的結(jié)果根據(jù)不同的檢測(cè)項(xiàng)目和放置時(shí)間的長(zhǎng)短分組后進(jìn)行配對(duì)結(jié)果分析。

各時(shí)點(diǎn)80%及以上結(jié)果與2H以內(nèi)結(jié)果偏差小于允許偏差，視為可接受（但只要開始有結(jié)果超出允許偏差，該項(xiàng)目此后時(shí)點(diǎn)均視為不可接受）：

一、PT檢測(cè)結(jié)果

所有樣本在各個(gè)時(shí)點(diǎn)的檢測(cè)結(jié)果與2H以內(nèi)結(jié)果偏差均小于允許偏差。（圖1）

二、APTT檢測(cè)結(jié)果

從8H開始，樣本3、7、9、10結(jié)果與2H結(jié)果偏差超過(guò)7.5%（實(shí)驗(yàn)室允許偏差），絕大部分（9/10）的樣本在采集24H之后的檢測(cè)結(jié)果與2H內(nèi)檢測(cè)結(jié)果偏差均超過(guò)了允許偏差。即未使用抗凝藥物的樣本，放置8H的APTT結(jié)果仍是可接受的（1/6的結(jié)果超出允許偏差），但使用了抗凝藥物的樣本，放置超過(guò)4H的結(jié)果就可能無(wú)法接受。（圖2）

三、FIB檢測(cè)結(jié)果

 樣本4的8H與2H內(nèi)結(jié)果偏差，及樣本5的12H與2H內(nèi)結(jié)果偏差超過(guò)10%（FIB實(shí)驗(yàn)室允許偏差），其余結(jié)果偏差均未超過(guò)實(shí)驗(yàn)室允許偏差。（圖3）

圖3   標(biāo)本放置時(shí)間對(duì)FIB結(jié)果的影響

四、ATIII檢測(cè)結(jié)果

所有6份樣本在4H、8H、12H、24H的AT檢測(cè)結(jié)果與2H內(nèi)的檢測(cè)結(jié)果偏差均未超過(guò)10%。（結(jié)果見下圖和下表）

圖4  標(biāo)本放置時(shí)間對(duì)AT結(jié)果的影響

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，在滿足一定先決條件的情況下（及時(shí)離心且常溫加蓋放置），普通標(biāo)本放置24H對(duì)PT、AT檢測(cè)結(jié)果的影響均可接受。一般標(biāo)本放置8H的APTT結(jié)果尚可接受，但應(yīng)用了抗凝藥物的患者標(biāo)本放置8H，APTT結(jié)果大多變得不能接受。這一結(jié)果與Wang等人的研究[3]較為吻合。APTT結(jié)果的穩(wěn)定性較差可能是由于不穩(wěn)定因子的時(shí)間依賴性生成或丟失，特別是因子 VIII和V ^[4]。而在患者使用阿加曲班、UFH等抗凝藥物的時(shí)候，標(biāo)本放置時(shí)間的延長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致APTT的結(jié)果增加更為明顯，使用低分子肝素的患者則未觀察到類似的現(xiàn)象�？赡艿脑�因是阿加曲班和UFH直接和間接的抑制凝血酶活性，這一抑制效應(yīng)在體外會(huì)隨著時(shí)間增強(qiáng)。因此我們建議APTT檢測(cè)應(yīng)在采集后4H內(nèi)完成。

而即使使用了阿加曲班、LMWH、UFH的患者，PT結(jié)果在采樣離心后24小時(shí)內(nèi)都能保持穩(wěn)定，這與Magnette等人的研究結(jié)果^[5]一致，表明這類抗凝藥物的使用在體外相當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)也不會(huì)造成PT結(jié)果的明顯變化。

在FIB的實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，所有標(biāo)本放置4H后的檢測(cè)結(jié)果和2H內(nèi)檢測(cè)結(jié)果的差值都在實(shí)驗(yàn)室允許偏差內(nèi)，而從8H開始就有個(gè)別樣本的變化程度超過(guò)實(shí)驗(yàn)室的允許誤差。Feng等人的研究^[1]中提到的FIB測(cè)定結(jié)果能在24H內(nèi)保持穩(wěn)定，而Wang等人的研究^[3]中提到的FIB測(cè)定結(jié)果能在8H內(nèi)保持穩(wěn)定�；�于本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們建議FIB在標(biāo)本采集后8H內(nèi)完成檢測(cè)。

所有樣本在24H內(nèi)的ATIII檢測(cè)結(jié)果與首次檢測(cè)結(jié)果的差值都未超過(guò)實(shí)驗(yàn)室允許偏差，說(shuō)明離心后室溫放置24H內(nèi)的ATIII檢測(cè)結(jié)果似乎都是可靠的。進(jìn)一步觀察發(fā)現(xiàn)，當(dāng)樣本在室溫下放置12H、24H后，所有樣本的檢測(cè)結(jié)果較2H內(nèi)檢測(cè)結(jié)果都逐漸下降。表明標(biāo)本體外放置12H后ATIII的活性開始下降。

局限性：本次實(shí)驗(yàn)標(biāo)本量較少，僅供參考。且未調(diào)查采樣到離心的時(shí)間、標(biāo)本放置的溫度和標(biāo)本是否加蓋等對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。

綜上所述，對(duì)及時(shí)離心（采樣后2H內(nèi)）且室溫加蓋放置的凝血樣本，APTT檢測(cè)應(yīng)在采樣后4H內(nèi)完成（若未應(yīng)用抗凝藥物，可放寬至8H內(nèi)），F(xiàn)IB檢測(cè)應(yīng)在采樣后8H內(nèi)完成，PT和ATIII則在采樣后24H內(nèi)檢測(cè)均可。而臨床實(shí)踐中，未及時(shí)檢測(cè)的樣本未必能做到及時(shí)離心和加蓋放置，因此建議放置時(shí)間盡量短。選擇檢測(cè)速度更高的高通量凝血分析儀或能在一定程度上減少這類影響。

參考文獻(xiàn)

1.    Feng L, Zhao Y, Zhao H, Shao Z. Effects of storage time and temperature on coagulation tests and factors in fresh plasma. Sci Rep. 2014 Jan 27;4:3868.

2.    Kitchen S, Olson JD, Preston FE. Quality in Laboratory Hemostasis and Thrombosis. Bognor Regis: Wiley-Blackwell, 2nd Edition. 2013; 22–44.

3.    Wang X., Ma J. Z. H. & Hao Z. L. Influence of storage time of PT and APTT at different temperature. Journal of Hebei Medical University 23, 108–109 (2002).

4.    Kottke-Marchant K, David B. Laboratory hematology practice. Wiley-Blackwell. 2012;31:416–7.

5.    Magnette A, Chatelain M, Chatelain B, Ten Cate H, Mullier F. Pre-analytical issues in the haemostasis laboratory: guidance for the clinical laboratories. Thromb J. 2016 Dec 12;14:49. doi: 10.1186/s12959-016-0123-z.