摘要
隨著生物醫(yī)學的發(fā)展，DNA甲基化（DNA methylation）標志物在癌癥診斷、治療選擇及預后評估中的重要性日益凸顯。本專家共識旨在全面梳理DNA甲基化標志物的檢測技術、臨床應用及其在腫瘤管理中的潛力。此外，本共識將圍繞DNA甲基化標志物的定義、臨床意義、檢測規(guī)范、數(shù)據(jù)處理及其在腫瘤的篩查、輔助診斷、伴隨診斷及復發(fā)監(jiān)測中的應用，結合最新研究進展和實際臨床經(jīng)驗，提出一系列關于DNA甲基化標志物檢測及應用的共識推薦，旨在提升臨床醫(yī)技人員對這一新興標志物的認識，規(guī)范檢測流程，促進其在腫瘤診療全程中的應用，從而為患者提供更加精準有效的治療方案。
【關鍵詞】 DNA甲基化；生物標志物；腫瘤早篩早診；甲基化檢測技術
在現(xiàn)代腫瘤治療領域，腫瘤DNA甲基化標志物作為一種重要的生物標志物，在癌癥的早期診斷、治療選擇及預后評估中扮演著越來越關鍵的角色。為了推動DNA甲基化標志物在腫瘤管理中的應用，提高臨床醫(yī)技人員及科研人員對其重要性的認識，同時規(guī)范檢測流程，確保檢測結果的準確性和可靠性，中國抗癌協(xié)會腫瘤標志專業(yè)委員會組織了一批領域內(nèi)的專家學者，基于最新的研究成果和臨床實踐經(jīng)驗，共同編寫了本專家共識。本共識系統(tǒng)性地介紹了DNA甲基化標志物的基本概念、檢測技術、臨床應用范圍及其在腫瘤篩查、輔助診斷、伴隨診斷、復發(fā)監(jiān)測和預后評估中的作用。本專家共識旨在為臨床醫(yī)生、研究人員及檢測人員提供一套關于DNA甲基化標志物檢測及其臨床應用的指導性建議，以促進該領域的標準化發(fā)展，最終實現(xiàn)個性化腫瘤診療策略的優(yōu)化，為患者的早篩、早診以及精準診療提供決策依據(jù)。根據(jù)相關領域的研究進展，本專家共識將及時進行修訂，以滿足臨床應用的需要。
本專家共識已在國際實踐指南注冊平臺上登記，編號為PREPARE-2024CN173。證據(jù)收集于PubMed、中國知網(wǎng)、萬方和維普等數(shù)據(jù)庫，以及國家藥品監(jiān)督管理局（NMPA）、美國食品藥品管理局（FDA）、歐盟醫(yī)療器械數(shù)據(jù)庫（EUDAMED）等官方公開信息（檢索截至2024年3月22日）。所選取的研究包括國內(nèi)外公開發(fā)表的系統(tǒng)性綜述、隨機對照試驗、隊列研究以及病例對照研究等。通過對文獻進行綜合分析并結合臨床經(jīng)驗初步確定了推薦建議。本專家共識的循證醫(yī)學證據(jù)等級參考牛津循證醫(yī)學中心（OCEBM）的證據(jù)等級（表1）。初步推薦建議經(jīng)過專家投票，投票選項包括同意、不確定和不同意。根據(jù)專家投票結果，推薦等級分為強推薦、推薦和未達成共識三個級別，若投票同意率超過90%視為強推薦，70%~90%視為推薦，否則為未達成共識。
DNA甲基化標志物概述
DNA甲基化是一種DNA的共價修飾，具體是指DNA甲基轉移酶（DNA methyltransferases，DNMTs）將甲基加到DNA CpG序列中胞嘧啶的5'碳位，形成5-甲基胞嘧啶的過程。成簇的CpG被稱為CpG島（CpG islands，CGIs），主要位于結構基因的啟動子和第一外顯子區(qū)域。DNA甲基化標志物是癌細胞中的DNA異常甲基化改變，這種異常甲基化貫穿于癌癥發(fā)生和發(fā)展的全過程。與傳統(tǒng)的腫瘤標志物相比，DNA甲基化標志物具有更早期、更無創(chuàng)、更精準等優(yōu)點。因此，可以通過非侵入性方式獲得的痰液、血漿、血清或尿液等樣本進行DNA甲基化標志物檢測。一些DNA甲基化異常發(fā)生在腫瘤形成的初始階段，通過檢測與腫瘤發(fā)展相關的甲基化標志物，可以輔助癌癥早期診斷、評估進展風險。DNA甲基化標志物甲基化水平的增加或降低與腫瘤預后密切相關，可用于治療或根治性手術后評估腫瘤微小殘留病灶（MRD）和監(jiān)測復發(fā)。此外，DNA甲基化標志物還可作為化療敏感性的標志，某些特定基因的甲基化可能預示著癌癥對治療的反應，可用于判斷化療藥物的療效，以更好地指導治療方案。
DNA甲基化標志物的臨床檢測
2.1 臨床樣本前處理注意事項
細胞基因組與游離DNA（cell-free DNA，cfDNA）均可用于腫瘤DNA甲基化檢測，常采用組織、血液樣本，也可采用尿液、漿膜腔積液、灌洗液、糞便、拭子等樣本。針對不同樣本類型還應注意以下事項：⑴組織樣本。組織樣本離體后應在低溫、水合狀態(tài)下保存和轉運。如不能立即開展后續(xù)處理，可選擇將組織置于-70 ℃及以下環(huán)境，以長期保存；或者制成石蠟包埋組織（formalin-fixed paraffin-embedded，F(xiàn)FPE），可于室溫保存3~5年。⑵血液樣本。采集血漿標本，抗凝劑選用EDTA或枸櫞酸，不可使用肝素。檢測cfDNA時建議足量采集2×10 mL全血。溶血、脂血和黃疸標本建議重新采集。樣本運輸過程中應避免機械應力致血細胞破裂，氣動管道運輸可能增加細胞基因組DNA釋放。目前，臨床腫瘤DNA甲基化分析常檢測的血液組分包括外周血單個核細胞（peripheral blood monocyte，PBMC） 、循環(huán)游離DNA（circulating cell-free DNA，ccfDNA）、循環(huán)腫瘤DNA（circulating tumor DNA，ctDNA），但不同組分的生物學特點存在差異（表2）。采用普通抗凝采血管時，采集后至分離不宜超出4~6 h，因為后續(xù)白細胞穩(wěn)定性會下降；如條件限制、延遲分離不可避免，則在4 ℃下保存不超出24 h。采用添加防腐劑的采血管時，建議在3 d內(nèi)進行分離。轉移無細胞血漿時應嚴格避免混入細胞及細胞碎片，并轉移至低DNA吸附管中保存。分離待測組分前不可冷凍保存含有紅細胞的全血樣本，以免嚴重溶血。經(jīng)分離后待測組分可在-70 ℃及以下長期保存，注意避免反復凍融，而且解凍過程需置于冰上緩慢進行。⑶新鮮體液及灌洗液樣本。如樣本含較多血液成分，可進行抗凝處理，避免室溫下長時間放置�？赏ㄟ^高速離心及超濾技術富集分離細胞或cfDNA。經(jīng)分離后，待測組分的處理同血液樣本。⑷糞便樣本。糞便樣本含大量微生物，采集保存過程應遵循所用試劑耗材說明并盡快送檢，縮短DNA抽提前非冷凍保存及運輸時間。推薦使用含防腐劑保存液，以減少人源性DNA降解。⑸拭子樣本。應使用專用采集器，采樣后可置于保存液或風干保存。風干拭子室溫下保存不超過3 d，后續(xù)操作前需加入緩沖液重懸；在保存液中，拭子樣本在2~8 ℃下保存不超過7 d，-20 ℃下保存不超過30 d。
【專家共識】
各類樣本經(jīng)采集后，應盡可能減少轉運環(huán)節(jié)與耗時，及早分離檢測組分。血液樣本應避免溶血，不可使用肝素抗凝。檢測游離DNA時，采集量應充足，及早采用兩步離心法分離無細胞血漿，分離前不可對含紅細胞血樣進行凍存。新鮮體液及灌洗液樣本如含較多血液成分可進行抗凝處理。糞便樣本推薦采用含防腐劑保存液。（推薦等級：強推薦）
2.2 DNA甲基化標志物檢測技術方法
2.2.1 DNA提取與純化 宜根據(jù)樣本類型、檢測目的選擇DNA提取純化方法，臨床常采用離心柱法和磁珠法。提取純化應在專門區(qū)域內(nèi)進行，cfDNA與細胞、組織樣本應分區(qū)處理，以避免基因組污染。推薦使用自動化提取設備，以減少批次間差異。提取后宜盡快檢測，長期保存應避免反復凍融（建議≤3次）。針對不同檢材，抽提前還應注意以下操作事項：⑴組織檢材。取材應選取細胞密集區(qū)域，避免出血、壞死、自溶部分。腫瘤細胞比例含量<20%時建議富集。新鮮組織塊應經(jīng)液氮冷凍后研磨或使用設備破碎勻漿。FFPE樣本切片厚度以8~10 μm為宜，脫蠟后予酶消化去除蛋白、脂質等物質，消化酶處理條件較新鮮組織濃度高（>20 g／L）、時間長（3~5 h）。⑵細胞檢材。糞便、體液、灌洗液、緩沖液拭子等樣本可用于富集脫落細胞，其中糞便樣本應以緩沖液或裂解液充分振蕩、裂解，離心去除不可溶性沉淀物后再操作。⑶cfDNA檢材。抽提過程中選用特定磁珠產(chǎn)品可保留較完整DNA、富集較短DNA片段，高效分離核酸有利于下游甲基化檢測。cfDNA經(jīng)提取純化后應評估片段分布，以排除基因組DNA污染。
2.2.2 DNA轉化 目前DNA轉化的主流技術包括基于化學試劑的重亞硫酸鹽轉化和基于酶法的溫和轉化，而甲基化敏感的限制性內(nèi)切酶技術（methylation sensitive restriction endonuclease PCR，MSRE-PCR）無需轉化處理。
基于化學試劑的重亞硫酸鹽轉化技術通過重亞硫酸鹽處理DNA，將DNA中未甲基化的胞嘧啶（C）轉化為尿嘧啶（U），經(jīng)過PCR擴增后進一步變成胸腺嘧啶（T）而原本甲基化的C保持不變，通過測序后對DNA序列的分析區(qū)分甲基化狀態(tài)的不同。重亞硫酸鹽轉化時間短，速度快，轉化效率高，但轉化過程中劇烈的溫度和pH變化會導致DNA降解和斷裂，因此此類轉化技術更適用于起始量較高的樣本。
基于酶法的溫和轉化技術利用易位雙加氧酶2（ten-eleventranslocation methylcytosine dioxygenase 2，TET2）和T4-噬菌體-β-葡糖基轉移酶（thermo scientific T4 -glucosyltransferase，T4-BGT）進行，該技術相對溫和，避免了DNA降解和斷裂，但試劑儲運條件要求高，操作繁瑣，反應時間長，轉化效率不如化學法穩(wěn)定，目前還有待進一步的臨床驗證�；谝孜浑p加氧酶氧化和硼烷類化合物還原的新型酶法轉化技術能將甲基化的C轉化為二氫尿嘧啶（dihydro uracil，DHU），通過PCR擴增轉化為T，但此類技術轉化效率和穩(wěn)定性尚需進一步優(yōu)化。
MSRE-PCR技術基于甲基化敏感的限制性內(nèi)切酶無法切割位點中甲基化修飾序列的原理，無需對序列進行轉化。因此，MSRE-PCR需要的起始樣本要求低，比對效率高，是未來DNA甲基化檢測應用具有發(fā)展?jié)摿Φ姆较�。MSRE-PCR技術操作簡單，DNA損失少，但是酶切效率需要進一步優(yōu)化，以保證檢測的準確性。
2.2.3 DNA甲基化檢測平臺 目前臨床最常用的DNA甲基化檢測平臺為實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR），下一代測序（next generation sequencing，NGS）和核酸質譜也有一定應用。qPCR平臺可同時檢測一個或數(shù)個DNA甲基化標志物，因操作簡單而在臨床中廣泛應用。qPCR平臺對DNA進行轉化處理后，用引物和特異性探針對所測核苷酸位點進行檢測，具有簡便、高效、快速、可重復等優(yōu)勢。數(shù)字PCR（digital PCR，dPCR）是新興的第三代PCR檢測技術，通過將每個核酸分子分配到一個獨立的空間內(nèi)，對多個獨立單元中的反應體系進行相互獨立的擴增，并讀取其反應后的熒光強度，以界定陰性和陽性及其比例。dPCR具有絕對定量、靈敏度高、分辨率好等特點。
NGS可以同時進行數(shù)百個至全基因組的DNA甲基化檢測，檢測通量高，但技術和操作復雜。DNA甲基化檢測的文庫構建策略分為“先建庫后轉化”和“先轉化后建庫”兩種。cfDNA檢測主要包括5個步驟：DNA提取、文庫構建、測序、生信分析和報告解讀。NGS平臺應結合客觀條件和診治需要選擇不同的基因panel，用于癌癥早篩的NGS檢測需要進行前瞻性臨床試驗。目前尚無獲批臨床使用的基于NGS平臺的DNA甲基化檢測產(chǎn)品，部分產(chǎn)品在注冊評審過程中或以實驗室自建檢測方法（laboratory developed test，LDT）形式進行檢測服務，適用于單癌種、多癌種或泛癌的檢測。
核酸質譜平臺基于基質輔助激光解吸電離飛行時間（MALDI-TOF）技術，可同時檢測數(shù)個至數(shù)十個DNA甲基化標志物，可實現(xiàn)中通量級別的穩(wěn)定檢測，可以獲得最大500 bp范圍之內(nèi)全部連續(xù)的CpG位點的甲基化定量水平。部分檢測機構提供LDT檢測服務，適用于單個或多個腫瘤的檢測。檢測時需注意避免反應體系中的Na+、K+等鹽離子殘留導致核酸峰的位置漂移，樣本和基質的結晶要充分，儀器的質量校準要定期校對，校準準確度在400 ppm及以下，分辨率在400及以上。
【專家共識】
抽提純化所得DNA應根據(jù)樣本類型制定質量合格標準并進行評價，包括濃度、純度和DNA完整性。cfDNA還應評估片段分布，以排除基因組DNA污染。DNA甲基化檢測需要針對不同的標本類型與檢測應用選擇適宜的轉化方法，并關注轉化技術的最新進展。qPCR具有高效、迅速、操作簡便等優(yōu)勢；基于NGS平臺的DNA甲基化檢測通量高，但操作復雜且成本較高；核酸質譜平臺是一個在通量、價格、時間等方面均介于PCR和NGS技術之間的平臺。DNA甲基化檢測平臺的選擇需要針對標志物數(shù)量、臨床應用場景及檢測條件進行綜合評估。（推薦等級：強推薦）
DNA甲基化標志物用于腫瘤篩查
3.1 DNA甲基化標志物在單癌種篩查中的應用
利用外周血進行cfDNA甲基化檢測是近年來針對腫瘤早期進行無創(chuàng)診斷的重要方式。2008年已有研究證實結腸癌組織SEPTIN9基因啟動子存在不同程度甲基化，并提出外周血SEPTIN9 甲基化可用于結直腸癌（colorectal cancer ，CRC）早期篩查 。2024年，《新英格蘭醫(yī)學雜志》連發(fā)兩篇關于CRC無創(chuàng)篩查的研究成果，其中一款基于血液 cfDNA 基因組變異、DNA甲基化狀態(tài)和碎片組模式的CRC早期篩查工具Shield，在ECLIPSE研究中診斷CRC的敏感性為 83.1%（95%CI：72.2%~90.3%），特異性為 89.6%（95%CI：88.8%~90.3%）。通過檢測LASS4、LRRC4、 PPP2R5C和ZDHHC1基因甲基化篩查,CRC的BLUE-C研究顯示，其檢測敏感性為 93.9%（95%CI：87.1%~97.7%）；檢出晚期癌前病變的敏感性為 43.4%（95%CI：41.3%~45.6%），對非腫瘤性發(fā)現(xiàn)或陰性結腸鏡檢查的特異性為 92.7%（95%CI：92.2%~93.1%）。國內(nèi)一項納入1 381例患者的多中心前瞻性研究證實RNF180和SEPTIN9基因甲基化是理想的胃腺癌標志物，對早期胃癌（Ⅰ期、Ⅱ期）的檢測靈敏度遠高于CEA、CA199、CA125等傳統(tǒng)的蛋白腫瘤標志物。《中國早期胃癌篩查檢驗技術專家共識》首次提出，RNF180/Septin9基因甲基化檢測可用于早期胃癌篩查，聯(lián)合檢測RNF180、Septin9基因甲基化和腫瘤標志物可進一步提升胃癌篩查的靈敏度。通過在肺泡灌洗液中聯(lián)合SHOX2和RASSF1A甲基化檢測對肺癌的總體診斷結果均優(yōu)于單純的細胞學檢查，對肺癌的早篩早診具有積極的臨床意義。采用外周靜脈血進行靶向DNA甲基化測序，構建PulmoSeek模型用于輔助臨床醫(yī)生建立肺結節(jié)良惡性診斷模型，有助于提高早期肺癌的診斷。國內(nèi)研究團隊通過cfDNA的 DNA甲基化水平構建早期肝癌診斷預測模型，結果發(fā)現(xiàn)基于 cfDNA甲基化的預測模型對早期肝癌的靈敏度和特異度均優(yōu)于傳統(tǒng)血清標志物。
DNA甲基化技術也可以應用于宮頸癌篩查的高危分流，能對人乳頭瘤病毒（HPV）陽性患者進行初步分流。上海交通大學附屬國際和平婦幼保健院團隊建立了納入3 251例hrHPV陽性女性的前瞻性研究隊列，對HPV檢查的剩余樣本進行PCDHGB7基因甲基化檢測，與細胞學檢測相比，PCDHGB7甲基化檢測減少了62.2%的非16/18型高危hrHPV陽性女性的轉診，顯示出更為優(yōu)越的特異度（92.1% vs 74.9%）。
【專家共識】
DNA甲基化技術為腫瘤早篩提供了一種高效、非侵入性且具有廣泛應用潛力的篩查方法，實現(xiàn)了對結直腸癌、胃癌、肺癌、肝癌和宮頸癌的早診早篩。（證據(jù)等級：2級；專家推薦等級：推薦）
3.2 DNA甲基化標志物在多癌種篩查中的應用
隨著癌癥篩查技術的不斷進步，臨床上主要有兩種多癌種篩查策略，第一種是以全癌標志物為代表的單一標志物的全癌種篩查，第二種是結合了組織溯源技術的多個腫瘤標志物組合篩查策略。
3.2.1 基于全癌標志物策略的多癌種篩查應用 應用導航定位測序（guide positioning sequencing，GPS）技術，通過對全基因組DNA高精度和高覆蓋度的甲基化位點進行篩查，于文強團隊挖掘了基于DNA甲基化位點的全癌標志物，這類DNA甲基化標志物可用于多種癌癥的篩查，其中通過全基因組DNA甲基化數(shù)據(jù)挖掘的HIST1H4F基因在17種癌癥中呈異常高甲基化。該團隊篩選的全癌標志物PCDHGB7在不僅在TCGA數(shù)據(jù)庫的17種癌癥類型中都呈高甲基化，后續(xù)還在13種臨床腫瘤樣本中得到驗證。SIX6基因在10種常見癌癥類型的 678 份臨床樣本表現(xiàn)出普遍的高甲基化，其中，SIX6基因高甲基化診斷宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌及尿路上皮癌的ROC曲線下面積（area under the curve，AUC）分別為0.99、0.94及0.93，表明SIX6高甲基化是腫瘤進展的早期事件，可以應用于腫瘤的臨床早期篩查。
3.2.2 基于cfDNA的DNA甲基化標志物在多癌種篩查中的應用 基于cfDNA的DNA甲基化標志物由于其非侵入性特性已成為癌癥早期診斷有前途的生物標志物。一項針對cfDNA測序技術在腫瘤早篩中應用的研究顯示，cfDNA甲基化是預測癌癥信號來源的最佳標志物，甲基化分類器具有最高的腫瘤檢測靈敏度。在多癌種早檢研究THUNDER中，對血液中的cfDNA進行靶向甲基化檢測，檢測結直腸癌、食管癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌等6種腫瘤的敏感性為69.1%，特異性為98.9%。
隨著技術的發(fā)展，cfDNA甲基化與其他組學信息的整合極大地提高了腫瘤早期篩查的準確性。Van Thien Chi Nguyen研究團隊應用cfDNA甲基化組學和片段組學信息，在乳腺癌、結直腸癌、胃癌、肝癌和肺癌等5類腫瘤中進行診斷驗證，敏感性為72.4%、特異性為97.0%。清華大學研究團隊通過cfDNA甲基化特征構建SRFD-Bayes診斷模型，在乳腺癌、結腸腺癌、肺鱗癌、肺腺癌、肝細胞癌和前列腺癌等腫瘤中進行驗證，該模型對腫瘤定位的平均準確率為76.9%，腫瘤早期檢測的敏感性為86.1%，特異性為94.7%。
【專家共識】
通過檢測一種或幾種在多種癌癥中普遍存在的DNA甲基化標志物能夠快速地對多種癌癥進行初步篩查。這種方法適用于大規(guī)模的人群篩查，尤其是在資源有限的情況下，可以作為一種經(jīng)濟、有效的篩查手段。此外，結合了組織溯源技術的多個腫瘤標志物組合篩查策略，提供了更為精確的篩查結果，但這種策略的技術要求及成本更高。在選擇適合的癌癥篩查策略時，醫(yī)療專業(yè)人員需要綜合考慮篩查的目的、目標人群的特點、可用的醫(yī)療資源以及患者的具體情況。（證據(jù)級別：2級；專家推薦等級：強推薦）
3.3 DNA甲基化標志物在腫瘤篩查中的優(yōu)勢
DNA甲基化標志物在腫瘤篩查中有幾大優(yōu)勢：⑴具備腫瘤特異性。在不同的腫瘤階段，DNA甲基化位置和甲基化水平存在差異，而異常的DNA甲基化是腫瘤的特征之一。⑵發(fā)生在腫瘤早期甚至癌前病變階段。這些DNA甲基化的表觀遺傳變化大部分發(fā)生在腫瘤的早期，并持續(xù)存在于腫瘤發(fā)展全程，且在全部腫瘤類型中普遍存在。⑶可以液體活檢。腫瘤組織中的DNA甲基化片段可以釋放到血液和體液中，以ctDNA的形式存在，并可在血液中被穩(wěn)定地檢測。⑷不受干擾�？寺≡煅獙е碌耐蛔儗z測血液中ctDNA的突變造成很大的影響，而檢測ctDNA的甲基化不受影響。因此，在基于血液ctDNA的液體活檢中，檢測ctDNA甲基化比檢測ctDNA突變更準確。
DNA甲基化標志物用于腫瘤輔助診斷
4.1 DNA甲基化標志物用于組織病理學檢測
病理診斷（包括細胞和組織病理學檢查）可能會受標本質量和病理學家診斷水平的影響，新興的分子診斷方法如DNA甲基化檢測具有良好的組織特異性，更加敏感和客觀，可以克服形態(tài)學診斷的固有缺陷。
4.1.1 DNA甲基化用于輔助病理診斷 國內(nèi)肺癌研究數(shù)據(jù)顯示，在病理診斷模棱兩可的時候，穿刺活檢FFPE樣本的SHOX2和RASSF1A甲基化檢測的特異性為90.4%，敏感性為89.8%。甲狀腺癌也是我國高發(fā)癌種，甲狀腺穿刺的形態(tài)病理診斷也是工作難點，利用甲基化芯片可以有效區(qū)分甲狀腺良惡性病變，敏感性為94.3%，特異性為82.4% 。TIMP3、RARB2、SERPINB5、RASSF1、TPO和TSHR等6種基因甲基化組合在區(qū)分甲狀腺乳頭狀癌和正常甲狀腺組織時表現(xiàn)出91%的敏感性和81%的特異性。乳腺穿刺樣本可以通過10個甲基化指標的檢測組合進行良惡性區(qū)分，AUC值達0.960。前列腺穿刺可以使用PITX2甲基化輔助診斷。穿刺病理聯(lián)合甲基化檢測作為輔助診斷可以進一步提升診斷效力，減少漏診。
4.1.2 DNA甲基化用于病理亞分型 不同病理亞分型與患者的治療方案及預后密切相關，DNA甲基化標志物用于分子分型，也可以作為評估腫瘤侵襲性的方式之一。腦膠質瘤是臨床上常見的一類顱腦腫瘤，其構成比在腦腫瘤中高達60%。《2020版美國國立綜合癌癥網(wǎng)絡腦膠質瘤臨床實踐指南》指出MGMT基因啟動子甲基化是所有高級別腦膠質瘤（Ⅲ級和Ⅳ級）分子診斷的重要部分，其啟動子甲基化是腦膠質瘤患者預后的獨立預測因子。2019年，NMPA批準石蠟組織切片MGMT基因甲基化診斷試劑盒應用于臨床。國外研究團隊創(chuàng)建了一個中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類器，該分類器中76%的病理形態(tài)學和甲基化分級一致，12%的病例根據(jù)甲基化圖譜獲得了修訂診斷。
【專家共識】
腫瘤DNA甲基化檢測可以在病理診斷困難的標本中輔助提高診斷準確性（證據(jù)級別：3級，推薦等級：強推薦）。腫瘤DNA甲基化標志物能進行更精確的分子分型，指導治療和預后評估，如MGMT啟動子甲基化檢測（證據(jù)級別：1級；推薦等級：強推薦）。甲基化分類器模型應用在中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分子分型中將進一步提高其病理診斷的準確性。
4.2 DNA甲基化標志物用于脫落細胞學檢測
目前常見的含有腫瘤脫落細胞的標本類型主要有腦脊液、胸腔積液、腹腔積液、尿液、肺泡灌洗液等體液，以及糞便、宮腔表面刷取物、痰液等。
4.2.1 脫落細胞甲基化標志物用于女性生殖道腫瘤的臨床診斷 女性生殖道內(nèi)腔的通暢性讓刷取宮頸脫落細胞進行無創(chuàng)分子檢測子宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌成為可能。上海交通大學附屬國際和平婦幼保健院團隊對宮頸脫落細胞學檢查的剩余樣本進行PCDHGB7基因甲基化檢測，PCDHGB7檢測≥宮頸高級別鱗狀上皮內(nèi)瘤變的敏感性和特異性分別為82.1%和88.7%，檢測宮頸癌的AUC為0.97。兩項中國大型臨床研究分別使用PCDHGB7甲基化和PAX1甲基化進行高危型HPV陽性女性的分層管理，診斷的敏感性分別為82.4%和76.9%，特異性分別為91.1%和91.6 %。國內(nèi)外研究與專家建議，推薦子宮頸癌DNA甲基化篩檢臨床路徑（圖1）：⑴HPV陽性高風險或細胞學異常女性的分層管理；⑵ 宮頸Ⅲ型轉化區(qū)與潛在腺癌病人風險評估；⑶病變（癌）治療后監(jiān)測；（4）退出宮頸癌篩查計劃的評估。
40%~50%的子宮內(nèi)膜癌患者的宮頸脫落細胞可檢測到子宮內(nèi)膜癌細胞，這讓使用脫落細胞進行內(nèi)膜癌甲基化早期診斷具臨床可行性。通過宮頸口脫落細胞檢測子宮內(nèi)膜癌，PCDHGB7甲基化對早期（Ⅰ期）子宮內(nèi)膜癌診斷的敏感性為85.71%，特異性為80.60%，目前基于該基因的檢測產(chǎn)品已獲得歐盟CE認證。CDO1和CELF4甲基化檢測的敏感性和特異性分別為87.5%和90.8%，BHLHE22/CDO1/HAND2的敏感性和特異性分別為87.0%和86.0% 。衛(wèi)生棉條收集陰道樣本與醫(yī)師采樣可達到一致的DNA甲基化檢測水平。國內(nèi)外研究與專家建議，推薦子宮內(nèi)膜癌DNA甲基化篩檢臨床路徑：⑴影像學聯(lián)合甲基化篩檢；⑵生殖道出血分層管理；⑶子宮內(nèi)膜癌高風險人群篩查。
4.2.2 脫落細胞甲基化標志物用于膀胱癌的輔助診斷 國內(nèi)目前針對人尿液脫落細胞檢測試劑盒有2款被NMPA批準，分別是人類TWIST1基因甲基化檢測試劑盒和人類ONECUT2/VIM基因甲基化檢測試劑盒，檢測敏感性分別為88.2%和91.2%；特異性分別為86.8%和85.7 %。一些基于尿液脫落細胞DNA甲基化檢測早期膀胱癌的產(chǎn)品被FDA/CE批準上市，如AssureMDx（MDx Health，Irvine，CA，USA）及TAGMe（Epiprobe，Shanghai，China）。AssureMDx檢測膀胱癌敏感性為93%，特異性為86%，TAGMe檢測尿液中SIX6甲基化的狀態(tài)，其診斷尿路上皮癌的敏感性為86.67%，特異性為90.80%，該產(chǎn)品已獲歐盟CE認證，并于2023年獲得FDA的“突破性醫(yī)療器械認定”。
4.2.3 脫落細胞甲基化標志物用于結直腸癌的臨床診斷 2014年，F(xiàn)DA 批準全球第一款基于糞便脫落細胞DNA檢測的腸癌早篩試劑盒Cologuard，用于結直腸癌高危風險人群篩查。其包含有免疫法糞便潛血試驗、KRAS突變檢測、NDRG4和BMP3基因的甲基化檢測。國內(nèi)多款糞便脫落細胞甲基化檢測試劑盒也是基于這些指標進一步改善和提高試劑盒的診斷效能。針對國產(chǎn)試劑盒的研究數(shù)據(jù)表明，糞便基因甲基化檢測對Ⅰ、Ⅱ期結直腸癌的診斷敏感性可達95.45％，特異性為81.6％，適合用于其輔助診斷。糞便基因甲基化檢測存在的問題包括患者的依從性差、樣本現(xiàn)場獲取困難、異質性高以及糞便樣本檢測科室接受度差等。居家采樣結合實驗室檢測的模式可能更適合糞便樣本檢測。
4.2.4 脫落細胞甲基化標志物用于肺癌的輔助診斷 國內(nèi)相關研究顯示，肺泡灌洗液中聯(lián)合SHOX2和RASSF1A甲基化檢測對肺癌的總體診斷敏感性和特異性分別為72.8%和87.1%，敏感性顯著高于細胞學檢查。該試劑盒已被NMPA批準用于肺癌高風險人群輔助診斷。通過檢測肺泡灌洗液樣本中的HIST1H4F甲基化水平診斷肺癌，其特異性為96.7%，敏感性為87.0%，其中針對Ⅰ~Ⅱ期肺癌的敏感性為82.6%~84.5%。有團隊構建基于胸水脫落細胞的PCDHGB7甲基化診斷模型，判斷肺癌是否出現(xiàn)胸膜轉移的敏感性為94.21%。
【專家共識】
脫落細胞DNA 甲基化檢測是一種新型的、便捷的、無創(chuàng)的輔助癌癥早篩早診工具。脫落細胞甲基化檢測輔助宮頸癌、膀胱癌、結直腸癌及肺癌診斷已獲NMPA批準，具備臨床可行性，但仍需要在國內(nèi)更多臨床數(shù)據(jù)驗證下完善DNA甲基化標志物使用的臨床路徑（證據(jù)等級：2級；專家推薦等級：強推薦）。
4.3 DNA甲基化標志物用于血液檢測
血液中的DNA甲基化標志物可以在癌癥發(fā)生早期被檢測到，且伴隨癌癥發(fā)展和治療過程。國內(nèi)外已經(jīng)有大量的研究在不同癌種中對血液檢測DNA甲基化標志物進行探索，以期能夠輔助癌癥診斷。
4.3.1 結直腸癌 研究顯示外周血中甲基化SEPTIN9有助于輔助診斷結直腸癌，敏感性為80.0%，特異性為95.3%，聯(lián)合免疫法糞便潛血試驗（FIT）可進一步提高結直腸腺瘤的檢出率。此外，結直腸癌患者血漿樣本中Septin9、SDC2及BCAT1三種基因啟動子區(qū)域呈高甲基化水平，Septin9聯(lián)合SDC2、BCAT1具有較好的輔助診斷價值，敏感性為82.7%，特異性為96.9%，進一步聯(lián)合FIT和CEA，其AUC為0.962。上述基因檢測試劑盒已被NMPA批準用于疑似結直腸癌患者的輔助診斷。
4.3.2 胃癌 SEPTIN9與RNF180基因甲基化在胃癌患者血漿樣本中顯著升高，胃癌檢測的敏感性為61.76%，特異性為85.07%。該基因譜檢測試劑盒已被NMPA批準用于胃癌家族史或40歲以上胃癌高風險人群的檢測。RNF180、SEPTIN9基因甲基化聯(lián)合其他腫瘤標志物可進一步提升胃癌診斷敏感性，一項前瞻性隊列研究結果顯示RNF180、SEPTIN9聯(lián)合CA72-4檢測的總敏感性為68.6%。
4.3.3 肺癌 肺癌患者血漿中SHOX2甲基化水平顯著升高，診斷敏感性為60%，特異性為90%，相較于肺腺癌，其診斷小細胞肺癌 （80%）和鱗狀細胞癌（63%）具有更高的敏感性。SHOX2、RASSF1A及PTGER4等3種基因聯(lián)合檢測表現(xiàn)出良好的區(qū)分惡性和良性肺病的性能，敏感性為 87.0%，特異性為 98.0%，上述基因譜檢測試劑盒已被NMPA批準用于疑似肺癌患者的輔助診斷。
4.3.4 肝癌 國內(nèi)一項臨床研究通過檢測肝癌患者血漿ctDNA中的BMPR1、PLAC8、ATXN1及KLF3等10個基因的甲基化水平，診斷肝癌的敏感性為83.3%，特異性為90.5%。目前BMPR1和PLAC8基因甲基化試劑盒已被NMPA批準用于疑似肝癌患者的輔助診斷。還有研究發(fā)現(xiàn)在肝細胞癌患者ctDNA中存在大量獨立的高甲基化基因位點，如DBX2、THY1、TGR5、MT1M、MT1G、INK4A、VIM、FBLN1、RGS10、ST8SIA6和RUNX。
4.3.5 婦科生殖道腫瘤 相比于現(xiàn)在廣泛使用的CA125，cfDNA甲基化標志物的優(yōu)勢在于從平均風險人群中識別出早期卵巢癌患者。一項研究使用APC、RASSF1A、CHDH1、RUNX3、TFP12、SRP5和OPCML等7種基因的組合甲基化檢測卵巢癌，該組合檢測卵巢癌的特異性為90.57%，其中檢測早期卵巢癌的敏感性為85.37%，而CA125的敏感性僅為56.10%，特異性為64.15%。
【專家共識】
血液DNA甲基化標志物檢測輔助癌癥診斷的證據(jù)越來越多，尤其是DNA甲基化標志物在結直腸癌、胃癌、肺癌、肝癌的輔助診斷PCR試劑盒已經(jīng)在國內(nèi)獲批，但是還需要針對現(xiàn)有的產(chǎn)品不斷進行技術優(yōu)化，確保DNA甲基化檢測的可重復性和穩(wěn)定性（證據(jù)等級：2級；專家推薦等級：強推薦）。DNA甲基化檢測在卵巢癌中同樣具有較好的應用前景，但尚未成熟（證據(jù)等級：3級；專家推薦等級：強推薦）。
4.4 DNA甲基化標志物應用于腫瘤溯源
原發(fā)灶不明惡性腫瘤（carcinoma of unknown primary，CUP）是一類經(jīng)病理學診斷為轉移性惡性病灶，但是經(jīng)過常規(guī)檢查和評估仍不能確定原發(fā)部位的異質性腫瘤，占全部腫瘤病例的3%~5%。越來越多的研究證據(jù)表明通過對腫瘤甲基化狀態(tài)的檢測，可以實現(xiàn)對腫瘤原發(fā)部位的溯源。FERNANDEZ等通過對1 628例腫瘤患者組織標本的甲基化圖譜分析，鑒定并識別出 24 種腫瘤特異性的甲基化改變模式，能用于CUP的腫瘤類型溯源。MORAN等構建的基于組織DNA甲基化譜的腫瘤類型分類器（EPICUP）在7 691個腫瘤的驗證集中顯示出99.6%的特異性和97.7%的敏感性，DNA甲基化譜預測了216例CUP患者中的188例（87%）的原發(fā)來源。ZHU等利用組織特異性單細胞RNA測序數(shù)據(jù)集構建了一個定義為13種實體組織類型和40種細胞類型的DNA甲基化圖譜，結果顯示該圖譜能夠正確地預測不同腫瘤類型的起源細胞。
cfDNA甲基化已被證明是非常有前途的特征性標志物，不僅能檢測癌癥，還能定位其組織來源。一項針對cfDNA的測序分析技術在腫瘤早篩中的臨床研究，準確預測了75%（95/127）腫瘤樣本的組織信號來源。還有研究開發(fā)了組織特異性DNA甲基化標志物，其中肝源性DNA絕對濃度為能更好地區(qū)分結直腸癌肝轉移患者和無肝轉移患者。STACKPOLE等開發(fā)了基于cfDNA的腫瘤溯源方法并應用于408例結腸癌、肝癌、肺癌和胃癌患者及對照組，在97.9%的特異性下，檢測全期和早期癌癥的敏感性分別為 80.7% 和 74.5%，溯源全期和早期癌癥的準確率分別為89.1% 和 85.0%。
【專家共識】
腫瘤溯源是腫瘤臨床診療的重要工作，可為腫瘤精準治療提供依據(jù)。有別于傳統(tǒng)溯源方法，基于組織標本或cfDNA的DNA甲基化檢測在腫瘤溯源領域展示出良好的應用前景，但目前尚無獲批檢測試劑用于臨床，后續(xù)仍需積累充分的臨床驗證數(shù)據(jù)，以建立健全的數(shù)據(jù)庫和優(yōu)化檢測算法，進一步提高溯源技術的靈敏性和特異性（證據(jù)等級：3級；專家推薦等級：強推薦）。具體臨床實踐中仍需結合組織病理進行腫瘤溯源。
DNA甲基化標志物在腫瘤伴隨診斷中的應用
5.1 DNA甲基化標志物輔助藥物的選擇
MGMT啟動子區(qū)域甲基化水平可用于評估腦膠質瘤對替莫唑胺的敏感性，啟動子甲基化陽性的患者對替莫唑胺的敏感性高于甲基化陰性的患者。RASSF10基因甲基化可能是肝癌對多西他賽耐藥的標志；QPCT啟動子區(qū)域的甲基化程度及QPCT 的表達水平可以作為預測腎癌對舒尼替尼敏感性的生物學標志物；p16甲基化是預測胃癌對阿貝西利（Abemaciclib）敏感性的潛在標志物；TROP2 甲基化可預測乳腺癌對他莫昔芬耐藥；ERCC1和MGMT基因甲基化可作為結直腸癌患者對 FOLFOX 反應的預測標志物；HSP70甲基化通過與BCL2 mRNA 結合使其穩(wěn)定，導致胰腺癌細胞對治療產(chǎn)生耐藥。
5.2 游離DNA甲基化標志物監(jiān)測藥物反應
隨著生物信息學的進步和cfDNA甲基化檢測技術的不斷成熟，目前已經(jīng)建立了癌癥特異性甲基化模式，使通過檢測cfDNA甲基化（血液或其他體液）進行動態(tài)監(jiān)測藥物反應成為可能在接受新輔助化療和/或手術的非小細胞肺癌中，RASSF1A和RARβ2甲基化會下降到健康受試者水平，提示動態(tài)檢測DNA甲基化水平可以監(jiān)測其治療反應。在接受順鉑化療的肺癌患者中，24 h內(nèi)APC和/或RASSF1A甲基化水平增加與總生存期（overall survival，OS）增加相關。臨床觀察發(fā)現(xiàn)，對化療和（或）放療有反應的晚期肺癌患者在開始治療后7~10 d內(nèi)血漿中SHOX2甲基化水平下降，且治療前和治療后7~10d的高SHOX2甲基化水平與較短的OS相關。在婦科腫瘤中，通過檢測cfDNA中MLH1的甲基化水平可預測卵巢癌患者對鉑類藥物的敏感性；通過檢測HOXA9和RAD51C基因的甲基化水平可預測PARPi的治療效果；而檢測KANSL1甲基化水平可預測卵巢癌的免疫治療療效。
【專家共識】
MGMT基因甲基化水平與腦膠質瘤藥物替莫唑胺的敏感性密切相關，該基因的甲基化檢測已經(jīng)成熟應用于臨床（證據(jù)等級：1級；專家推薦等級：強推薦）。一些基因的DNA甲基化水平與肝癌、胃癌、乳腺癌、腎癌、結直腸癌及胰腺癌的藥物敏感性有關，但仍需更多臨床試驗進一步驗證（證據(jù)等級：3級；專家推薦等級：強推薦）。通過檢測cfDNA的甲基化水平，可以動態(tài)監(jiān)測肺癌和卵巢癌患者對治療方案的反應，但不同癌種的治療方式存在差異，且DNA甲基化評分標準也不同，在臨床應用前需要建立相應質控標準（證據(jù)等級：2級；專家推薦等級：強推薦）。
DNA甲基化標志物用于腫瘤預后監(jiān)測
6.1 DNA甲基化標志物用于評估腫瘤的微小殘余病灶
經(jīng)手術或治療后的MRD是腫瘤復發(fā)的主要原因。DNA甲基化標志物用于MRD分析時不需要獲得原發(fā)腫瘤特征性的突變信息，其靈敏度不依賴于患者高頻突變數(shù)量，對MRD檢測具有很大的潛力。目前，已有證據(jù)證實DNA甲基化標志物可應用于MRD檢測，以此識別術后高復發(fā)風險人群，以篩選輔助治療獲益人群，避免復發(fā)低風險患者承受過度的治療。
基于LUNAR-1研究結果，利用ctDNA突變聯(lián)合ctDNA甲基化對結直腸癌患者進行MRD檢測及復發(fā)監(jiān)測，與單獨ctDNA突變相比，整合ctDNA甲基化分析的敏感性提高25%~36%。一項前瞻性Ⅱ~Ⅲ期臨床試驗（注冊號：NCT00958737）納入805例結直腸癌患者分析了手術前后血漿樣本中ctDNA甲基化標志物（WIF1和NPY）評估MRD與腫瘤復發(fā)的關系，發(fā)現(xiàn)ctDNA陰性組2年無病生存率明顯高于ctDNA陽性組（82% vs 64%）。另一項Ⅱ~Ⅲ期回顧性研究納入87例乳腺癌患者，經(jīng)新輔助化療后，患者血漿中ctDNA基于RASSF1A啟動子的超甲基化（met-ctDNA）水平與殘余腫瘤負荷程度顯著相關（P=0.008）；同時，術后1年met-ctDNA陽性患者中（7例）有3例出現(xiàn)腫瘤復發(fā)，而met-ctDNA陰性患者均未出現(xiàn)。
【專家共識】
基于ctDNA甲基化標志物的MRD分析不需要對腫瘤組織進行測序以獲得原發(fā)腫瘤的特征性突變信息，并且不受克隆造血導致的突變干擾，可用于結直腸癌和乳腺癌患者術后或其他治療完全緩解后的MRD檢測，有望成為腫瘤患者預后風險管理的關鍵工具（證據(jù)等級：2級；專家推薦等級：強推薦）。DNA甲基化標志物在MRD分析上的應用潛力遠未完全挖掘，仍需大量的臨床數(shù)據(jù)來支持其擴展至更多癌種，并對現(xiàn)有的技術流程和內(nèi)容進行深入優(yōu)化，以進一步提高其臨床應用價值。
6.2 DNA甲基化標志物用于腫瘤復發(fā)監(jiān)測
cfDNA較短的半衰期使其與腫瘤細胞演進狀態(tài)密切相關，也使其用于腫瘤復發(fā)的動態(tài)監(jiān)測成為可能。在一項肝癌的大隊列臨床數(shù)據(jù)研究中，通過整合全基因組甲基化水平、臨床大數(shù)據(jù)分析和機器學習，建立了含有8個甲基化標志物的肝癌預后預測模型，生存曲線顯示高風險組生存率均明顯低于低風險組，且該預測模型對預后的評估能力優(yōu)于臨床分級。類似地，基于ctDNA甲基化標志物的機器學習算法用于CRC患者的預后判斷研究發(fā)現(xiàn)，治療后腫瘤殘留患者及復發(fā)患者的評分較高，此外預后預測模型還能有效預測CRC患者的預后和生存期。還有一項針對Ⅰ~Ⅲ期CRC的多中心、前瞻性隊列研究納入了299例患者，分析手術前、手術后、輔助化療時及化療結束后血漿中6種ctDNA甲基化標志物水平，結果發(fā)現(xiàn)術后1個月ctDNA甲基化陽性患者的復發(fā)風險是陰性患者的17.5倍，而且該甲基化檢測提示復發(fā)轉移早于影像學證據(jù)，中位期提前3.3個月。在CRC中，cfDNA甲基化標志物結合血清CEA構建評分體系可在臨床或影像學發(fā)現(xiàn)復發(fā)灶之前預測復發(fā)，提前的中位天數(shù)為106 d（范圍：90~232 d）。在前列腺癌患者中，多西他賽治療兩個周期后檢測不到血清GSTP1甲基化的患者生存時間更長，提示血清游離 GSTP1 甲基化可能是一種有潛力的臨床試驗替代終點和臨床決策工具。
【專家共識】
DNA甲基化標志物可用于評估肝癌、結直腸癌及前列腺癌等腫瘤進展及復發(fā)的動態(tài)監(jiān)測，優(yōu)化患者風險分層及治療措施（證據(jù)等級：2級；專家推薦等級：強推薦）。常規(guī)復發(fā)監(jiān)測標志物與DNA甲基化預測模型相結合可進一步提升預測效能。
小結與展望
癌癥是全球死亡的主要原因之一，對癌癥的“早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療”可以降低所有類型癌癥的死亡率。目前，表觀遺傳學領域的研究正處于蓬勃發(fā)展之中，其中DNA甲基化標志物的研究尤為突出，其研究方向包括：⑴深入探討DNA甲基化的調(diào)控機制，研究不同甲基化狀態(tài)下腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及對治療的耐藥性差異，為后續(xù)DNA甲基化標志物的開發(fā)提供更加扎實的理論依據(jù)；⑵在技術層面，致力于開發(fā)新型甲基化轉化、甲基化檢測技術和方法，以提升檢測的特異性和敏感性，并且為臨床應用鋪平道路；⑶開發(fā)組合的生物標志物，將多種DNA甲基化標志物結合或與其他類型的生物標志物結合使用，最終構建更可靠的生物標志物模型；⑷利用機器學習和深度學習算法對DNA甲基化數(shù)據(jù)進行預測分析，構建復雜的算法和模型，從海量的甲基化數(shù)據(jù)中識別出具有診斷或預后意義的甲基化標志物。本專家共識全面梳理了DNA甲基化標志物的檢測技術、臨床應用及其在腫瘤管理中的潛力，提出了一系列具有前瞻性和實踐指導意義的共識推薦。未來，期待本共識進一步落地和實踐，為患者的健康保駕護航，為醫(yī)學領域發(fā)展貢獻更多的智慧和力量。
［編寫專家組成員］
編寫專家組學術顧問
吳開春 空軍軍醫(yī)大學西京醫(yī)院
曾木圣 中山大學附屬腫瘤醫(yī)院
單保恩 河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院
謝曉冬 沈陽軍區(qū)總醫(yī)院
編寫專家組組長
于文強 復旦大學
邢金良 空軍軍醫(yī)大學基礎醫(yī)學院
聶勇戰(zhàn) 空軍軍醫(yī)大學西京醫(yī)院
主要執(zhí)筆專家（按姓氏拼音排序）
丁春明 復旦大學附屬腫瘤醫(yī)院
郭 瑋 復旦大學附屬中山醫(yī)院
毛瑞芳 空軍軍醫(yī)大學西京醫(yī)院
輦偉奇 重慶市中醫(yī)院
向廷秀 重慶大學附屬腫瘤醫(yī)院
于津浦 天津醫(yī)科大學腫瘤醫(yī)院
楊政權 浙江省人民醫(yī)院
張海偉 重慶大學附屬腫瘤醫(yī)院
編寫專家組成員（按姓氏拼音排序）
慈維敏 北京基因組研究所
陳文娟 陜西省腫瘤醫(yī)院
郜世雋 江蘇鹍遠生物科技股份有限公司
黃 燕 四川大學華西醫(yī)院
化 琳 上海奕譜生物科技有限公司
韓曉亮 博爾誠科技有限公司
李 雷 北京協(xié)和醫(yī)院
李文斌 中國醫(yī)學科學院腫瘤醫(yī)院
劉禹利 北京起源聚禾生物科技有限公司
盧瑗瑗 空軍軍醫(yī)大學西京醫(yī)院
劉淑娟 空軍軍醫(yī)大學西京醫(yī)院
李小松 重慶醫(yī)科大學
劉 洋 空軍軍醫(yī)大學唐都醫(yī)院
馬艷俠 陜西中醫(yī)藥大學
申 鵬 南方醫(yī)科大學南方醫(yī)院
蘇海川 空軍軍醫(yī)大學唐都醫(yī)院
宋文杰 空軍軍醫(yī)大學西京醫(yī)院
王保龍 安徽省立醫(yī)院
魏 冰 河南省腫瘤醫(yī)院
楊蓉西 南京醫(yī)科大學
楊映紅 福建醫(yī)科大學附屬協(xié)和醫(yī)院
周 琳 上海長征醫(yī)院
張 莉 天津市第一中心醫(yī)院
趙 征 陜西省腫瘤醫(yī)院
張志偉 北京艾克倫醫(yī)療科技有限公司
編寫組秘書
李 偉 復旦大學
董亞萍 復旦大學
韓 雷 天津醫(yī)科大學腫瘤醫(yī)院
吳洪坤 上海長征醫(yī)院
虞 倩 復旦大學附屬中山醫(yī)院
袁 睿 重慶市中醫(yī)院
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