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引用

[1]陳小娟,向尹,陳俊良,等.結(jié)核分枝桿菌游離DNA檢測(cè)在肺外結(jié)核診斷中的價(jià)值[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2024,21(3):299-303.

關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌; 結(jié)核分枝桿菌游離脫氧核糖核酸; 結(jié)核分枝桿菌及利福平耐藥快速檢測(cè); 結(jié)核感染T細(xì)胞γ干擾素釋放試驗(yàn); 肺外結(jié)核

目的

探討結(jié)核分枝桿菌(MTB)游離DNA(cfDNA)檢測(cè)技術(shù)在肺外結(jié)核診斷中的應(yīng)用價(jià)值。

方法

    

選取2021年7月至2022年12月該院收治的高度疑似肺外結(jié)核患者266例作為研究對(duì)象,根據(jù)臨床診斷結(jié)果,分為肺外結(jié)核組117例和非結(jié)核組149例。所有患者均采集腦脊液、胸腔積液、尿液及血液標(biāo)本,并同時(shí)進(jìn)行MTB cfDNA檢測(cè)、結(jié)核分枝桿菌及利福平耐藥快速檢測(cè)(GeneXpert MTB/RIF)、涂片抗酸染色及血液標(biāo)本結(jié)核感染T細(xì)胞γ干擾素釋放試驗(yàn)(TB-IGRA)。通過分析4種檢測(cè)方法的效能指標(biāo)評(píng)估MTB cfDNA檢測(cè)技術(shù)在肺外結(jié)核病診斷中的臨床價(jià)值。

結(jié)果

MTB cfDNA檢測(cè)法、GeneXpert MTB/RIF和涂片抗酸染色對(duì)肺外結(jié)核患者不同類型標(biāo)本中MTB的檢出率比較。非結(jié)核組各類型標(biāo)本均未檢出MTB陽性病例。根據(jù)臨床最終診斷,肺外結(jié)核組包括結(jié)核性腦膜炎20例、結(jié)核性胸膜炎57例、泌尿系統(tǒng)結(jié)核31例、其他部位結(jié)核9例(淋巴結(jié)核3例、脊柱結(jié)核5例、腸結(jié)核1例)。MTB cfDNA檢測(cè)法對(duì)腦脊液中MTB的檢出率為25.00%,對(duì)胸腔積液的檢出率為22.81%,對(duì)尿液的檢出率為38.71%,對(duì)血漿檢出率為11.11%。MTB cfDNA檢測(cè)法對(duì)腦脊液、胸腔積液、尿液中的MTB檢出率均顯著高于涂片抗酸染色(P<0.05)。雖然MTB cfDNA檢測(cè)法對(duì)腦脊液、尿液中MTB的檢出率高于GeneXpert MTB/RIF,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);MTB cfDNA檢測(cè)法對(duì)胸腔積液中MTB的檢出率顯著高于GeneXpert MTB/RIF(P<0.05)。見表1。

    

MTB cfDNA檢測(cè)法、GeneXpert MTB/RIF、涂片抗酸染色、TB-IGRA在兩組患者中的MTB檢出率比較。在肺外結(jié)核組,MTB cfDNA檢測(cè)法對(duì)MTB的檢出率為26.50%(31/117),明顯高于GeneXpert MTB/RIF[15.38%(18/117)]和涂片抗酸染色[3.42%(4/117)],差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001);而TB-IGRA對(duì)MTB的檢出率為72.65%(85/117),明顯高于MTB cfDNA檢測(cè)法(P<0.001)。在非結(jié)核組,MTB cfDNA檢測(cè)法、GeneXpert MTB/RIF、涂片抗酸染色對(duì)肺外結(jié)核相關(guān)體液標(biāo)本進(jìn)行的MTB病原學(xué)檢測(cè)均未檢出陽性病例,但TB-IGRA 檢出陽性47例。見表2。

MTB cfDNA檢測(cè)法、GeneXpert MTB/RIF、涂片抗酸染色、TB-IGRA對(duì)肺外結(jié)核的診斷效能。MTB cfDNA檢測(cè)法、GeneXpert MTB/RIF、涂片抗酸染色、TB-IGRA診斷肺外結(jié)核的靈敏度分別為26.50%、15.38%、3.42%、72.65%,特異度分別為100.00%、100.00%、100.00%、68.46%,陽性預(yù)測(cè)值分別為100.00%、100.00%、100.00%、64.39%,陰性預(yù)測(cè)值分別為63.40%、60.08%、56.87%、76.12%。MTB cfDNA檢測(cè)法的靈敏度明顯高于GeneXpert MTB/RIF、涂片抗酸染色,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);TB-IGRA的靈敏度顯著高于MTB cfDNA檢測(cè)法,但其特異度顯著低于MTB cfDNA檢測(cè)法,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

討論

肺外結(jié)核由MTB侵犯肺部以外的組織器官引起,常見類型有結(jié)核性胸膜炎、結(jié)核性腦膜炎、結(jié)核性腹膜炎、泌尿系統(tǒng)結(jié)核、淋巴結(jié)核、腸結(jié)核、腹部結(jié)核等。MTB在正常代謝、凋亡或被破壞后可釋放其特異cfDNA片段IS6110并可通過PCR檢測(cè)。有研究發(fā)現(xiàn),肺外結(jié)核患者相關(guān)部位非痰液標(biāo)本中MTB特異性cfDNA的靈敏度和特異度可能高于診斷肺外結(jié)核的痰液標(biāo)本。本研究收集了肺外結(jié)核患者相應(yīng)部位的非呼吸道體液標(biāo)本(腦脊液、胸腔積液、尿液、血漿)進(jìn)行MTB cfDNA檢測(cè),檢測(cè)靶基因?yàn)镮S6110,通過比較其與GeneXpert MTB/RIF、涂片抗酸染色以及TB-IGRA檢測(cè)的靈敏度、特異度等效能指標(biāo),初步探討MTB cfDNA檢測(cè)在肺外結(jié)核診斷中的應(yīng)用價(jià)值。

本研究以CRS為參考標(biāo)準(zhǔn),以臨床最終診斷結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn),MTB cfDNA檢測(cè)法、GeneXpert MTB/RIF、涂片抗酸染色、TB-IGRA診斷肺外結(jié)核的靈敏度分別為26.50%、15.38%、3.42%、72.65%,特異度分別為100.00%、100.00%、100.00%、68.46%,陽性預(yù)測(cè)值分別為100.00%、100.00%、100.00%、64.39%,陰性預(yù)測(cè)值分別為63.40%、60.08%、56.87%、76.12%。MTB cfDNA檢測(cè)法的靈敏度明顯高于GeneXpert MTB/RIF與涂片抗酸染色檢測(cè),而明顯低于TB-IGRA檢測(cè),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。GeneXpert MTB/RIF為世界衛(wèi)生組織推薦的診斷肺結(jié)核及肺外結(jié)核的分子快速檢測(cè)方法,近年來已在臨床廣泛應(yīng)用。但GeneXpert MTB/RIF對(duì)于低菌量標(biāo)本的檢出率低,且對(duì)于不同類型標(biāo)本靈敏度差異較大,有研究報(bào)道其在胸腔積液中MTB檢出率最低。對(duì)于肺外結(jié)核相關(guān)標(biāo)本,由于其不易獲得大量標(biāo)本且含菌量低,涂片抗酸染色的檢出率極低。本研究在肺外結(jié)核組患者相關(guān)部位的非痰液標(biāo)本檢測(cè)中,MTB cfDNA檢測(cè)法對(duì)MTB的檢出率為26.50%,明顯優(yōu)于GeneXpert MTB/RIF及涂片抗酸染色,提示MTB cfDNA檢測(cè)在肺外結(jié)核的診斷中具有較好的應(yīng)用前景。TB-IGRA是通過檢測(cè)人體免疫系統(tǒng)對(duì)MTB感染的免疫反應(yīng)來判斷結(jié)核感染存在與否。患者的免疫狀態(tài)、疾病狀態(tài)、性別和年齡等因素均可能影響到TB-IGRA的結(jié)果,其特異度較MTB的病原學(xué)檢測(cè)低。在使用TB-IGRA進(jìn)行結(jié)核病診斷時(shí),需要綜合考慮臨床癥狀、病史以及其他檢測(cè)結(jié)果,故其對(duì)結(jié)核病診斷存在一定的局限性。本研究中TB-IGRA靈敏度明顯高于MTB cfDNA檢測(cè)法、GeneXpert MTB/RIF及涂片抗酸染色,但是其特異度僅為64.39%,而其他3種病原學(xué)檢測(cè)方法的特異度均為100.00%,提示對(duì)肺外結(jié)核的診斷與病原學(xué)檢測(cè)方法聯(lián)合使用可獲得較好的診斷效能。

筆者進(jìn)一步分析了使用不同類型標(biāo)本的MTB cfDNA檢測(cè)在肺外結(jié)核中的診斷效能,結(jié)果顯示MTB cfDNA檢測(cè)法對(duì)尿液中MTB的檢出率最高,對(duì)腦脊液和胸腔積液中MTB的檢出率次之。與GeneXpert MTB/RIF相比,MTB cfDNA檢測(cè)法對(duì)各類型標(biāo)本中MTB的檢出率均升高,但兩種檢測(cè)方法僅對(duì)胸腔積液中MTB檢出率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),提示其對(duì)結(jié)核性胸膜炎的診斷與其他分子檢測(cè)方法相比更具優(yōu)勢(shì),這也與多項(xiàng)研究結(jié)果相符。在對(duì)患者血漿標(biāo)本的檢測(cè)中,MTB cfDNA檢測(cè)法檢出1例陽性,而GeneXpert MTB/RIF與涂片抗酸染色均未檢出,提示cfDNA血漿檢測(cè)具有作為早期診斷肺外結(jié)核病工具的潛力,但本研究中血漿標(biāo)本量較小,且來自不同類型的肺外結(jié)核患者,其在肺外結(jié)核的診斷效能需要進(jìn)一步研究證實(shí)。

綜上所述,MTB cfDNA作為新型分子標(biāo)志物在肺外結(jié)核診斷中具有較好的應(yīng)用前景,有望為少菌型結(jié)核病患者尤其是病原學(xué)證據(jù)獲得困難的結(jié)核患者的早期診斷提供強(qiáng)有力的證據(jù)。

（參考文獻(xiàn)略）