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近期，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院檢驗(yàn)科徐英春教授、上海交通大學(xué)附屬瑞金醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科瞿介明教授為通信作者發(fā)布了《成人呼吸道感染病原診斷核酸檢測(cè)技術(shù)臨床應(yīng)用專(zhuān)家共識(shí)（2023）》。

該共識(shí)參考國(guó)內(nèi)外指南及文獻(xiàn)，分析了了實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)、等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)、數(shù)字PCR技術(shù)、核酸即時(shí)檢測(cè)技術(shù)和病原體高通量測(cè)序技術(shù)的臨床應(yīng)用場(chǎng)景、技術(shù)特點(diǎn)和性能驗(yàn)證要求，以及該類(lèi)技術(shù)在成人急性上呼吸道感染、氣管支氣管炎、社區(qū)獲得性肺炎、醫(yī)院獲得性肺炎/呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎、慢性阻塞性肺疾病急性加重、肺結(jié)核和免疫功能受損人群呼吸道感染中的應(yīng)用，以供臨床參考借鑒。

共識(shí)指出：“呼吸道感染性疾病在臨床中極為常見(jiàn)，病原體的快速檢測(cè)和精準(zhǔn)診斷是其有效治療的前提。傳統(tǒng)微生物學(xué)及免疫學(xué)技術(shù)對(duì)呼吸道病原體的檢測(cè)靈敏度偏低，核酸檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展和臨床應(yīng)用大幅提高了呼吸道病原體的診斷能力。”

共識(shí)核心推薦意見(jiàn)，見(jiàn)下表。

呼吸道病原體核酸檢測(cè)方法

分子診斷技術(shù)在呼吸道感染性疾病， 尤其是全球應(yīng)對(duì)新型冠狀病毒大流行中，發(fā)揮了重要作用，高靈敏度和高特異度的核酸擴(kuò)增試驗(yàn)（nucleic   acid    amplification  tests ，NAATs）已成為診斷新冠病毒感染的參考標(biāo)準(zhǔn)。隨著基因組學(xué)、工程學(xué)和納米科學(xué)等前沿學(xué)科的交叉融合快速發(fā)展，NAATs呈現(xiàn)出多種多樣的檢測(cè)方法和日新月異的技術(shù)手段，以 PCR為基礎(chǔ)發(fā)展出的實(shí)時(shí)熒光PCR、多重PCR、數(shù)字PCR和等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，以及高通量測(cè)序、基因芯片、核酸質(zhì)譜、生物傳感器等檢測(cè)技術(shù)，在大型實(shí)驗(yàn)室批量檢測(cè)或現(xiàn)場(chǎng)核酸即時(shí)檢測(cè)（point-of-care testing, POCT）中得以廣泛應(yīng)用。

1 實(shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù)

實(shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù)是一種可對(duì)核酸進(jìn)行定量的試驗(yàn)方法，其原理主要是通過(guò)實(shí)時(shí)采集熒光信號(hào)對(duì)核酸擴(kuò)增進(jìn)行監(jiān)測(cè)。在PCR擴(kuò)增的指數(shù)時(shí)期，模板的Ct值與其起始拷貝數(shù)存在線性關(guān)系，可實(shí)現(xiàn)對(duì)未知樣本的定量檢測(cè)。

2 等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)

相較傳統(tǒng) PCR 變溫技術(shù)，等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)通常不需要改變反應(yīng)溫度，該技術(shù)方案多、技術(shù)原理差異較大，且各具優(yōu)勢(shì)，但基本原理仍是以特異性酶和引物進(jìn)行擴(kuò)增。等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)大多為指數(shù)擴(kuò)增，目前多為定性檢測(cè)[9]。

3 數(shù)字 PCR 技術(shù)

數(shù)字PCR是一種不依賴于核酸外標(biāo)的核酸絕對(duì)定量技術(shù)[12] 。其原理是通過(guò)微流控技術(shù)，將目標(biāo)核酸和 PCR 反應(yīng)液分布在多個(gè)反應(yīng)單元內(nèi)進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，以液滴形式進(jìn)行檢測(cè)的方式也被稱為微滴數(shù)字 PCR 。該技術(shù)通過(guò)檢測(cè)擴(kuò)增后每個(gè)反應(yīng)單元的熒光信號(hào)強(qiáng)度，判斷含有目標(biāo)核酸的反應(yīng)單元個(gè)數(shù)，基于泊松分布計(jì)算起始樣本中的目標(biāo)核酸分子數(shù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)核酸濃度的絕對(duì)定量。

4 核酸即時(shí)檢測(cè)技術(shù)

核酸即時(shí)檢測(cè)為 POCT 技術(shù)中涉及核酸檢測(cè)的一大類(lèi)技術(shù)的總稱， 是核酸提取技術(shù)和分子擴(kuò)增技術(shù)（包括實(shí)時(shí)熒光 PCR 、巢式 PCR、等溫?cái)U(kuò)增、數(shù)字PCR等技術(shù)）的融和。其最大特點(diǎn)是將核酸的提取、擴(kuò)增、檢測(cè)均置于一個(gè)反應(yīng)裝置中，通過(guò)特定設(shè)備對(duì)擴(kuò)增信號(hào)檢測(cè)，完成對(duì)靶標(biāo)核酸的篩查。目前核酸POCT主要以全自動(dòng)封閉管理系統(tǒng)為主。

5 病原體高通量測(cè)序技術(shù)

病原體高通量測(cè)序技術(shù)是采用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)臨床標(biāo)本中的核酸進(jìn)行測(cè)序，通過(guò)與微生物參考基因組比對(duì)獲取標(biāo)本中的微生物物種組成、物種豐度等信息[15]。目前該技術(shù)主要分為三類(lèi)：無(wú)偏倚檢測(cè)的 mNGS、檢測(cè)多重病原體及其耐藥基因或毒力基因的tNGS 和獲取某一種或多種病原體全基因組數(shù)據(jù)的高通量測(cè)序技術(shù)（whole-genome sequencing ，WGS）。

共識(shí)全文

注：參考文獻(xiàn)略

來(lái)源：協(xié)和檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志