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PCR 簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)就是在合適條件下，熱變性-復(fù)性-延伸過(guò)程的不斷重復(fù)。整個(gè)過(guò)程有點(diǎn)像是織圍巾，但也不完全是這樣�？棁�巾（PCR）所必須的原材料有這樣幾個(gè)元素織樣（模板）、起針（引物對(duì)）、毛線（dNTP）和針（Taq酶以及緩沖體系）。

首先要將織樣拆解開（通過(guò)95℃高溫，將DNA雙鏈拉鏈狀解鏈），然后將實(shí)現(xiàn)織好的起針配合在織樣上（通過(guò)退火將合成的引物結(jié)合在單鏈的模板上），按照織樣（模板），沿著起針（引物）用毛衣針（Taq酶）將毛線（dNTP）一針針連接上去（72℃下延伸擴(kuò)增）。

通過(guò)對(duì)所有織樣（包括原先的模板及新形成的模板）的拆解（解鏈）及新的起針（引物）搭配（結(jié)合）、編織（Taq酶擴(kuò)增）這樣循環(huán)n次后，圍巾的數(shù)量就以2的n次方（產(chǎn)物量就以2的n次方）增多了。

PCR試驗(yàn)最早是以Klenow片段進(jìn)行擴(kuò)增的，由于這種酶高溫會(huì)變性，所以最早的PCR實(shí)驗(yàn)員是很苦逼的，每個(gè)循環(huán)都需要開蓋、加酶、換水浴鍋，這樣35個(gè)循環(huán)……后來(lái)發(fā)現(xiàn)了Taq酶之后，事情就簡(jiǎn)單了，由于Taq酶可以應(yīng)付高溫環(huán)境，于是就產(chǎn)生了新的PCR儀，也就是現(xiàn)在的定時(shí)變溫金屬浴。還有別忘了加熱蓋，沒(méi)有熱蓋的話，管內(nèi)高溫會(huì)導(dǎo)致液體全都蒸發(fā)到管蓋上，就沒(méi)法擴(kuò)增了。

PCR的技巧，關(guān)鍵的PCR技巧在于引物的設(shè)計(jì)，這個(gè)我們以后還可以深入解釋。但有的時(shí)候，如果要克隆固定片段，引物設(shè)計(jì)位置是定死的，只能微調(diào)，那什么引物設(shè)計(jì)軟件都是白搭。

其次的關(guān)鍵是鎂離子濃度，鎂離子是Taq酶的激活劑，濃度過(guò)低會(huì)導(dǎo)致PCR產(chǎn)量下降，濃度過(guò)高則會(huì)產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增。