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社區(qū)獲得性肺炎（CAP）屬于臨床常見病，具有較高的發(fā)病率和死亡率。雖然CAP的診斷不難，但在多數(shù)實(shí)驗(yàn)室，引起下呼吸道感染的三大病原菌：肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌，卡他莫拉菌的分離率幾乎為零。所以采取必要的措施，分離出這三種病原菌，是提高病原菌檢出率的最有效方法。

3種最常見的社區(qū)獲得性下呼吸道病原菌最有效的抗生素是：

肺炎鏈球菌，青霉素95%敏感；嗜血桿菌：阿莫西林/克拉維酸100%；卡他菌：阿莫西林/克拉維酸95%。可見快速鑒定上述3種菌，是對(duì)合理使用抗生素做的最實(shí)際的工作。

圖1：痰涂片鏡檢，肺炎鏈球菌呈“矛頭狀”或“瓜子仁”狀，與WBC伴行（箭頭所示）

圖2：肺鏈在二氧化碳環(huán)境生長的菌落形態(tài)

痰涂片染色鏡檢，見到有莢膜的陽性雙球菌，瓜子仁樣相對(duì)排列，不被WBC吞噬可確定為肺炎鏈球菌。此種標(biāo)本在培養(yǎng)基營養(yǎng)成分不是很好，而又無二氧化碳箱的實(shí)驗(yàn)室，即使生長的菌落無肺炎鏈球菌的t特征，也要做奧普托欣敏感試驗(yàn)，并在生長了疑似肺鏈的平板上直接做膽汁溶菌試驗(yàn)。

卡他莫拉菌的菌落形態(tài)在顯微鏡下與非致病原奈瑟菌相同，但痰涂片鏡檢完全不同，卡他菌與白細(xì)胞伴行或被吞噬，非致病菌不致病，不會(huì)出現(xiàn)白細(xì)胞，只與上皮細(xì)胞伴行。

接種的血平板與巧克力平板放二氧化碳溫箱，培養(yǎng)24小時(shí)，細(xì)菌生長良好；中國藍(lán)或麥康凱平板生長不良或不生長。

圖3：痰標(biāo)本直接涂片，WBC吞噬卡他莫拉菌

圖4：卡他菌菌落（灰白、干燥，易碎）

血、巧克力、中國藍(lán)三種平板卡他生長

鑒定步驟如下：

1.菌落涂片，革蘭氏陰性雙球菌；2.氧化酶試驗(yàn)：陽性；3 .將待測(cè)菌落點(diǎn)種在DNA酶平板，同時(shí)接種金葡菌，做陽性對(duì)照。35度培養(yǎng)24小時(shí)，滴加1N鹽酸溶液蓋滿平板，在菌落周圍出現(xiàn)透明環(huán)為陽性；4.痰涂片鏡檢見到白細(xì)胞吞噬或伴行陰性雙球菌的現(xiàn)象與上述三個(gè)試驗(yàn)有高度的一致性。

平板中心是金葡菌，DNA酶陽性。左側(cè)兩個(gè)菌落是卡他莫拉菌，右側(cè)是非致病奈瑟菌。原理：細(xì)菌產(chǎn)生DNA酶使長鏈水解，水解后的寡核苷酸鏈可溶于酸，菌落周圍形成透明環(huán)。

DNA酶瓊脂中加入甲基綠，可與培養(yǎng)基中的長鏈DNA結(jié)合成穩(wěn)定的綠色復(fù)合物，當(dāng)DNA被水解時(shí)，甲基綠釋放，菌落變?yōu)闊o色。此平板因太厚，產(chǎn)DNA酶的卡他菌沒有能力水解瓊脂深層的DNA，綠色依然存在，使結(jié)果判斷為陰性。

在上述平板上加入1N鹽酸后，被卡他菌水解的DNA長鏈成為寡核苷酸短鏈溶解在鹽酸中，菌落周圍出現(xiàn)透明環(huán)。此方法為比甲基綠方法敏感。

分離流感嗜血桿菌的關(guān)鍵是優(yōu)質(zhì)的巧克力平板和二氧化碳溫箱，此菌只在放入二氧化碳溫箱的巧克力平板上生長，灰白，濕潤，1毫米大小，半透明。

圖5：痰標(biāo)本直接涂片，WBC伴行嗜血桿菌

圖6：流感嗜血桿菌菌落（扁平，灰白，光滑、濕潤）

鑒定步驟： 

1：革蘭氏陰性小桿菌；2:只生長在放入二氧化碳的巧克力平板；3：因子生長2及衛(wèi)星現(xiàn)象。

衛(wèi)星現(xiàn)象是血平板和MH平板上分別涂待測(cè)的嗜血桿菌，用金黃色葡萄球菌劃在兩種平板上。只有在血平板上金黃色葡萄球菌有細(xì)菌生長，MH平板上不生長，才能確定為流感嗜血桿菌。

所用的金黃色葡萄球菌必須在MH平板上挑取，生長在血平板上的金黃色葡萄球菌，因沾上少量的V因子在MH平板上，使金黃色葡萄球菌周圍出現(xiàn)細(xì)菌，而將待測(cè)的流感嗜血桿菌誤認(rèn)為副流感。

最好使用因子生長試驗(yàn)方法，用胰蛋白胨大豆瓊脂配制平板，將待測(cè)的嗜血桿菌涂在平板上貼V、X、及V+X因子紙片放二氧化碳溫箱培養(yǎng)24小時(shí)，只在V+X因子周圍生長的是流感嗜血桿菌，V+X因子及V因子周圍都生長的是副流感嗜血桿菌。