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一、手工操作與自動化操作的差異

臨床檢驗的技術(shù)和概念，應(yīng)該分為原先的手工操作和自動化操作。臨床檢驗是從手工操作走向自動化操作的。至今也許還有許多人，以為自動化只是以機械動作替代了原先手工操作的做法而已。這是非常錯誤的！因此必須深入了解原先的手工操作，與現(xiàn)在的自動化操作之間的巨大差異！

臨床檢驗的歷史不長。頂多上百年。而使用化學(xué)試劑進行化學(xué)反應(yīng)對分析物檢測的歷史，則更短。進行免疫方法檢測的歷史，還要短！只是70年左右的時間。至今，那些稍稍老一些的檢驗人員，如我經(jīng)歷過手工操作和自動化操作變更的人員，也許體會更多一些。但是，每個人有不同的認識和體會。在自動化儀器進入中國前，已經(jīng)有不少檢測方法為了適應(yīng)自動化，有了很大的改變�？墒�，國外、尤其是國內(nèi)，還體會不出，那些在操作上的變化，不僅僅是操作簡單快速，而是許多做法和概念上的更新！我們當(dāng)時，也包括我在內(nèi)，只是看了報告的文章，發(fā)現(xiàn)檢測方法有了很大改進，簡化了操作。國內(nèi)一些老前輩也紛紛在實驗室模仿使用。但是，引入的后果渾然不知！嚴(yán)重影響了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度！還作為首先使用的人，在國內(nèi)進行推廣應(yīng)用！

舉例來說：肌酐、尿素、葡萄糖。這三項從引入國內(nèi)作為經(jīng)典的臨床化學(xué)的主要項目，無一不是要進行無蛋白處理！對病人全血加入鎢酸試劑后，過濾得到無蛋白血濾液。然后分別使用不同試劑進行檢測，得到各個結(jié)果。有名的Folin-Wu名字，也許大家會知道。就是這位吳憲前輩，在拜Folin為師讀博士學(xué)位時，實驗解決了Folin無法使用堿性苦味酸去檢測血液內(nèi)肌酐的難題！吳憲發(fā)明了首先用鎢酸沉淀血液蛋白和所有有形物后，對濾液進行檢測。這個方法被推廣到全世界！這樣，使得很多原先無法檢測血液內(nèi)的分析物，現(xiàn)在都可以進行了！我1965年進入上海市醫(yī)學(xué)化驗所。在臨床化學(xué)室，檢驗老師告訴我：臨床化學(xué)最要緊的是兩件事:做好無蛋白血濾液；第二標(biāo)準(zhǔn)要準(zhǔn)。你的檢測結(jié)果肯定沒問題。但是，每天對所有標(biāo)本必須進行鎢酸試劑處理，要得到這些濾液很艱難！冬天沉淀很慢，費時費力！

國外報告了肌酐檢測，可以不要進行鎢酸前處理。直接使用血清加堿性苦味酸試劑，就可以比色檢測了！這個方法很快在國內(nèi)推廣，而且即刻被寫進檢驗書內(nèi)！大家感到這樣的方法多好！解放了勞動力！簡化了操作！可是幾乎沒有人深入去思考：為什么原先做無蛋白血濾液，只是為了用全血做標(biāo)本！現(xiàn)在用血清了，所以不必再做無蛋白血濾液了。

當(dāng)時，臨床實驗室要了解檢測結(jié)果的可靠性時，大多會做回收實驗。但是怎樣做回收實驗？怎樣的計算值可靠的？很少深入了解。我是在上世紀(jì)70年代，學(xué)到了Westgard的方法學(xué)評價系列文章。非常高興。其中就有如何進行回收實驗。當(dāng)時我們已經(jīng)自己制備控制品。為了了解，對處理過血清內(nèi)外加肌酐后，血清內(nèi)的肌酐濃度是否達到我們預(yù)期的要求。因此，開始進行回收實驗。

二、回收實驗實例

回收 (recovery)，分析方法對于樣品中分析物的適當(dāng)增量能實際檢出的能力。用于該目的的實驗為“回收實驗”。

共有5例回收率結(jié)果，取平均回收率表示方法的回收水平。平均回收率為87.74%。理想狀態(tài)的回收率為100%，它與   的差表示由回收實驗估計的比例誤差（proportional error , PE ）的大小。比例誤差表達的方式有兩種，一種直接用相對于100%回收率的差表示，寫成PE( % )；一種是在醫(yī)學(xué)決定水平分析物濃度下具有的比例誤差量，直接以分析物濃度表示，寫成PE。

進行回收實驗計算上，還有人錯誤地將原樣品中具有的分析物濃度也一并計入。這是錯誤的�；厥罩傅氖�，實驗加入分析物增量，實驗是否可正確檢測。與原樣品中有多少分析物無關(guān)。如果要計入原樣品中分析物濃度，將會有很大的誤解。如樣品中原分析物濃度為100，現(xiàn)加入的分析物為1。若該樣品現(xiàn)在檢測的濃度為100，按照錯誤理解，回收率為:100/101!幾乎為100%！實際回收率為0！

四、總結(jié)

實驗究竟錯在哪里？重新閱讀我2007年寫的“臨床檢驗質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)-第二版”書后，我頓時羞愧難言！因為，我在書中講的以回收實驗去估計基質(zhì)效應(yīng)，是非常錯誤的！我要向所有讀者抱歉！認錯！還是這次有同道要我對回收實驗做介紹，翻閱這本書這個內(nèi)容，才發(fā)現(xiàn)有嚴(yán)重問題！

如果，我們依然如多年前手工操作那樣，在使用堿性苦味酸檢測前，首先對血清以鎢酸處理；得到上清濾液后，再用堿性苦味酸檢測內(nèi)含的肌酐，這是可行的。因為，此時使用水配制的肌酐標(biāo)準(zhǔn)液與檢測樣品具有非常相似的基質(zhì)狀態(tài)。對濾液內(nèi)加入肌酐標(biāo)準(zhǔn)液，這個回收樣品與未加過標(biāo)準(zhǔn)的回收對照樣品，也具有幾乎相似的基質(zhì)狀態(tài)。這樣一組回收樣品與苦味酸反應(yīng)，與標(biāo)準(zhǔn)肌酐的苦味酸反應(yīng)幾乎一致。由此，可以從反應(yīng)的回收率，了解檢測結(jié)果的正確度！但是，在上世紀(jì)70年代起推出的肌酐直接方法，沒有考慮基質(zhì)效應(yīng)的影響。

標(biāo)準(zhǔn)液參與苦味酸顯色反應(yīng)時，與標(biāo)本參與苦味酸反應(yīng)具有的基質(zhì)狀態(tài)完全不同！因此，一定會嚴(yán)重影響檢測結(jié)果的可靠性！在這個情況下，還用標(biāo)準(zhǔn)液進行回收實驗，無法說明這個實驗究竟揭示了什么問題。因此，回收實驗只能諸如以往的經(jīng)典鎢酸前處理后，再用堿性苦味酸顯色的肌酐方法！

今天，在臨床實驗室使用的檢測方法，幾乎全部是為自動化考慮的。也即，對人來源的血清、血漿直接在反應(yīng)杯中，加入試劑反應(yīng)。在這樣的情況下，必須使用具有相似基質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)作為參考。這個要求，促使推出了校準(zhǔn)品。但是，校準(zhǔn)品的定值又成了非常關(guān)鍵的內(nèi)容。推動了互換性、溯源性、一致性的觀點！無論什么實驗，這些觀點和做法，都離不開最最基本的方法學(xué)比較！以方法學(xué)比較說明情況，比什么都強！