
上世紀80年代,上海市臨床檢驗中心(原上海市醫(yī)學化驗所)為了在上海開展質(zhì)量控制,自行開發(fā)制備控制品。為了防止血清內(nèi)α脂蛋白在冷凍干燥過程中,因脂蛋白變性使血清在凍融后產(chǎn)生渾濁,在加工中必須首先以葡聚糖硫酸鈉沉淀去除脂蛋白,方可使凍干后的血清制品復溶后沒有沉淀,非常清晰。然后,經(jīng)透析等步驟后,重新加入不少低分子的物質(zhì),包括肌酐。按照血清體積,計算需要添加的肌酐量后,將稱量的肌酐直接倒入血清,攪拌后取樣,以苦味酸方法檢測回收量。但是,每次對肌酐檢測加入前后的樣品,總是發(fā)現(xiàn)最后得到的肌酐含量,僅是加入量的85%~90%。
是什么原因造成肌酐含量的下降?
1993年,我在中美臨床實驗室交流第一次會議上,聽到了Dr Fred Lasky的報告。他介紹的就是基質(zhì)和基質(zhì)效應。我頓時被報告吸引了。原來在對血清內(nèi)某個分析物檢測時,在分析物周圍的非分析物(即該分析物的基質(zhì)),對檢測結(jié)果有顯著影響。被稱之為“基質(zhì)效應”。我立刻就想到,原來的肌酐檢測,應該是去除蛋白后再行檢測的,這可以完全消除了蛋白對肌酐檢測的影響。因此,可以使用以水配制的肌酐標準,以苦味酸方法檢測,F(xiàn)在,進行血清的直接檢測,明顯地受到血清內(nèi)蛋白的嚴重影響。蛋白對肌酐檢測的影響完全可以稱之為基質(zhì)效應。
因為,以肌酐水溶液為標準,進行血清不除蛋白的肌酐檢測時,蛋白作為肌酐檢測的基質(zhì),它們對肌酐檢測結(jié)果的可靠性有著嚴重的影響。因此,我在配制檢測用的肌酐標準液時,不再以水配制,而是直接采用透析完成、即將加入各個添加分析物的血清。這樣在檢測時,可以將未添加肌酐的血清為自身空白,將添加過肌酐的血清檢測吸光度減去未添加肌酐血清的檢測吸光度,即為添加肌酐參與苦味酸反應的吸光度。按照這樣的做法,加入肌酐的回收率為100%。
采用真實的病人血清作“標準”(校準品),校準檢測系統(tǒng),再由該檢測系統(tǒng)去檢測病人血清,以此克服標準液和真實血清間的基質(zhì)效應。但是,該“標準”血清內(nèi)也含有要檢測的分析物,它的濃度為多少?需要采用檢測系統(tǒng)先檢測。不同的檢測系統(tǒng)(方法學、檢測程序)對該“標準”血清的檢測結(jié)果不同。因此,校準品的定值一定與檢測它的系統(tǒng)有關(guān)。即:校準品的值依賴于檢測系統(tǒng);也一定沒有各個檢測系統(tǒng)通用的校準品。在疾病控制中心等實驗室,他們對各種樣品的檢測,因為不同來源的樣品很復雜,本身引入了樣品的基質(zhì)差異。為此,他們對每個樣品進行三個實驗檢測:A、樣品;加檢測試劑。B、樣品加標準液;加檢測試劑。C、樣品空白;加空白試劑。這樣,以空白校0;檢測樣品和檢測樣品加標準的顯色。以B檢測信號減去A檢測信號;為標準信號D。將A檢測信號除以上述D信號,再與標準濃度相乘,即為該樣品的分析物結(jié)果。這個方法非常實在?上,每個樣品均需要做三個檢測,非常費時。臨床實驗室無法實現(xiàn)。
克服標準和樣品內(nèi)分析物所處基質(zhì)環(huán)境不一引起的檢測差異。這樣的做法應該講是最佳的。但是,10個樣品需要10個對應標準液,10個對應空白!1000個樣品就需要1000個“標準液”!增加了實驗室大量負擔。這個做法在疾病控制中心對不同類型樣品的檢測,就是這樣做的。結(jié)果說明非常有意義?墒菍嶒炇颐刻斓臉悠妨亢艽,這樣的操作無法承受。最終,可以用于自動化檢測的校準品,只能使用處理過樣品。面臨的問題是,如何對這樣的校準品給予定值?Fred Lasky的報告是正確對校準品定值的做法。
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