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新冠疫情不斷蔓延，核酸檢測(cè)在疫情的防控中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。為了監(jiān)測(cè)「提取、擴(kuò)增」等環(huán)節(jié)，目前市場(chǎng)上已有多個(gè)產(chǎn)品均在核酸擴(kuò)增試劑內(nèi)加入了「內(nèi)標(biāo)」，包括「內(nèi)源性?xún)?nèi)標(biāo)」和「外源性?xún)?nèi)標(biāo)」，兩種方式各有利弊。

「內(nèi)源性?xún)?nèi)標(biāo)」的一個(gè)優(yōu)勢(shì)就是可監(jiān)測(cè)「采樣」[1]。這樣的說(shuō)法并不能完全囊括所有的臨床場(chǎng)景；例如：在「單檢」過(guò)程中，內(nèi)源性?xún)?nèi)標(biāo)僅能監(jiān)測(cè)采集到足夠人體細(xì)胞，不能判斷采樣部位是否正確；其次，在大規(guī)�！富鞕z」中，標(biāo)本漏檢也難以發(fā)現(xiàn)。

因此，在實(shí)際工作中應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況，選擇合適的試劑；并且無(wú)論使用哪種內(nèi)標(biāo)的擴(kuò)增試劑，都需要保證采用過(guò)程的規(guī)范化。

「內(nèi)標(biāo)」、「內(nèi)源性?xún)?nèi)標(biāo)」和「外源性?xún)?nèi)標(biāo)」是什么

在檢驗(yàn)工作中，如 PCR 擴(kuò)增靶標(biāo)基因擴(kuò)增呈現(xiàn)「陰性」，存在哪些可能性呢？

可能受試者為「真陰性」，也可能是由于采樣、提取和擴(kuò)增階段存在問(wèn)題，導(dǎo)致的「假陰性」[2]。各個(gè)廠(chǎng)家為了減少「假陰性」的發(fā)生率，通過(guò)改變核酸擴(kuò)增試劑的配置，可通過(guò)檢測(cè)內(nèi)標(biāo)核酸是否「起線(xiàn)」，判斷是否存在「采樣、提取、擴(kuò)增」導(dǎo)致的假陰性。

內(nèi)標(biāo)分為「內(nèi)源性?xún)?nèi)標(biāo)」和「外源性?xún)?nèi)標(biāo)」，兩者的分析比較如下表 [3]:

「外源性?xún)?nèi)標(biāo)」可更好監(jiān)測(cè)提取、擴(kuò)增過(guò)程：

外源性?xún)?nèi)標(biāo)是在擴(kuò)增體系中的提前加入的「定量」核酸分子，擴(kuò)增中 Ct 值的變化幅度較小（某產(chǎn)品內(nèi)標(biāo) Ct 值為：30 ± 1），因此當(dāng)外源性?xún)?nèi)標(biāo)擴(kuò)增 Ct 值明顯變大時(shí)，提示核酸提取不足，或反應(yīng)體系中存在抑制物等。

然而內(nèi)源性?xún)?nèi)標(biāo)是人體的管家基因，隨著采集的人體細(xì)胞加入反應(yīng)體系，擴(kuò)增反應(yīng)的 Ct 值較大時(shí)，可能的原因不僅包括核酸提取不足、反應(yīng)體系中存在抑制物等，也可能是由于并未采集到足夠的細(xì)胞。

擴(kuò)增過(guò)程中，某樣本內(nèi)標(biāo)的 Ct 值升高。

可能原因分析：

• 外源性?xún)?nèi)標(biāo)：該樣本核酸提取不足，或反應(yīng)體系中存在抑制物
  
• 內(nèi)源性?xún)?nèi)標(biāo)：該樣本核酸提取不足，或反應(yīng)體系中存在抑制物，或未采集足量細(xì)胞

1 ~ 9 號(hào)樣本

Ct 值：20.0 ~ 28.1

10 號(hào)樣本

Ct 值：24.8

11~19 號(hào)樣本

Ct 值：22.8~28.2

20 號(hào)樣本

Ct 值：25.8

21 號(hào)樣本

Ct 值：26.0