
一、各區(qū)工作注意事項(xiàng):
1、試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)。貯存試劑和用于標(biāo)本制備的消耗品等材料應(yīng)當(dāng)直接運(yùn)送至試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū),不能經(jīng)過擴(kuò)增檢測(cè)區(qū),試劑盒中的陽性對(duì)照品及質(zhì)控品不應(yīng)當(dāng)保存在該區(qū),應(yīng)當(dāng)保存在標(biāo)本制備區(qū);
2、標(biāo)本制備區(qū)。由于在樣本混合、核酸純化過程中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染,可通過在本區(qū)內(nèi)設(shè)立正壓條件,避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。為避免樣本間的交叉污染,加入待測(cè)核酸后,必須蓋好含反應(yīng)混合液的反應(yīng)管。對(duì)具有潛在傳染危險(xiǎn)性的材料,必須在生物安全柜內(nèi)開蓋,并有明確的樣本處理和滅活程序;
3、擴(kuò)增區(qū)。為避免氣溶膠所致的污染,應(yīng)當(dāng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的走動(dòng)。必須注意的是,所有經(jīng)過檢測(cè)的反應(yīng)管不得在此區(qū)域打開;
4、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源,因此必須注意避免通過本區(qū)的物品及工作服將擴(kuò)增產(chǎn)物帶出。廢液及用過的吸頭必須收集至1 mol/L HCl中,不能在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)傾倒,浸泡后再放到垃圾袋中按程序處理。由于本區(qū)有可能會(huì)用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)如溴化乙錠、丙烯酰胺、甲醛或放射性核素等,故應(yīng)當(dāng)注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù);
5、注意物品流向,依次為:試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū),不可逆行;
6、試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)和擴(kuò)增區(qū)內(nèi)的實(shí)驗(yàn)用品應(yīng)專用,并設(shè)置不同的標(biāo)識(shí)、顏色等予以區(qū)分。
二、規(guī)范化的實(shí)驗(yàn)設(shè)置
應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制的相關(guān)規(guī)定,實(shí)驗(yàn)中應(yīng)設(shè)立陽性對(duì)照、陰性對(duì)照和空白對(duì)照,全程質(zhì)控實(shí)驗(yàn)過程,驗(yàn)證PCR反應(yīng)的可靠性,并協(xié)助判斷擴(kuò)增系統(tǒng)的可信性。
三 、實(shí)驗(yàn)操作小貼士
1、實(shí)驗(yàn)應(yīng)在超凈工作臺(tái)或者生物安全柜內(nèi)進(jìn)行;
2、實(shí)驗(yàn)的過程中選擇最合適尺寸的手套并能及時(shí)更換,在進(jìn)出不同實(shí)驗(yàn)區(qū)域或進(jìn)行模板操作后都應(yīng)更換實(shí)驗(yàn)服、口罩、帽子及手套,以避免不同實(shí)驗(yàn)區(qū)交叉污染;
3、裝有PCR試劑的反應(yīng)管在打開之前應(yīng)先瞬時(shí)離心,將管壁及管蓋上的液體離至管底,降低污染手套或加樣器的風(fēng)險(xiǎn);謹(jǐn)慎開啟反應(yīng)管,防止管內(nèi)液體濺出或形成氣溶膠導(dǎo)致污染;需要高溫加熱的樣本,可采用封口膜進(jìn)行PCR管蓋密封,避免管蓋應(yīng)受熱而發(fā)生彈開;
4、吸加試劑和模板的操作應(yīng)嚴(yán)格按照規(guī)范要求進(jìn)行,遵守“慢吸快打”原則,盡量一次性完成,忌多次抽吸,以避免氣溶膠產(chǎn)生的交叉污染;
5、PCR試劑建議小量分裝,以減少反復(fù)凍融、重復(fù)取樣次數(shù)和反復(fù)使用過程中的試劑污染;多樣本PCR反應(yīng)時(shí),先配制反應(yīng)混合液分裝至反應(yīng)管中,最后加入樣本核酸,請(qǐng)勿同時(shí)開蓋,盡量保證單人單管,實(shí)現(xiàn)完全閉管操作;
6、實(shí)驗(yàn)試劑應(yīng)與樣品和PCR產(chǎn)物分開保存,不應(yīng)放于同處;
7、PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)完成后及時(shí)將反應(yīng)管取出,用一次性手套或者塑封袋將產(chǎn)物反應(yīng)管包裹丟棄,保證管蓋緊閉;
8、實(shí)驗(yàn)室自配試劑(去離子水、緩沖液等)和所有使用器具在使用之前均應(yīng)高壓滅菌或紫外殺菌,槍尖、反應(yīng)管等實(shí)驗(yàn)耗材應(yīng)一次性使用。
四、堅(jiān)持常規(guī)清潔工作
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后應(yīng)該對(duì)操作臺(tái)面,儀器,實(shí)驗(yàn)用具及環(huán)境進(jìn)行清潔,這對(duì)污染的控制尤為重要。
1、實(shí)驗(yàn)后所有的試劑按照要求進(jìn)行存放,廢料和廢液及時(shí)清理,避免存放過多和過久,廢液缸用有效氯含量為2000mg/L消毒水浸泡消除核酸污染;
2、離心管架、試管架等可重復(fù)使用的物品浸泡到500mg/L 的消毒液中過夜,第二天用清水清洗后晾干使用;
3、對(duì)各區(qū)的生物安全柜、潔凈工作臺(tái)先用75%酒精或者500mg/L 的消毒液擦拭后采用紫外燈進(jìn)行消毒處理;
4、配制含有效氯500mg/L 的消毒液對(duì)設(shè)備表面、臺(tái)面、地面、物品表面、傳遞窗內(nèi)及門窗進(jìn)行擦拭,再用純化水對(duì)設(shè)備表面、臺(tái)面、進(jìn)行擦拭,避免消毒液對(duì)實(shí)驗(yàn)器具的腐蝕,儀器如核酸提取儀采用內(nèi)部紫外消毒程序進(jìn)行照射;
5、操作臺(tái)面使用移動(dòng)紫外消毒車近距離輻照1小時(shí),應(yīng)使燈管距離工作區(qū)的距離在60-90cm;實(shí)驗(yàn)室內(nèi)則使用室內(nèi)紫外燈整晚輻照。
五、消除污染的操作步驟
1、清理廢液缸并且對(duì)廢液缸用有效氯含量為 2000mg/L 消毒水浸泡消除核酸污染;
2、用有效氯含量為 2000mg/L 消毒水對(duì)移液槍進(jìn)行擦洗,關(guān)鍵部位為移液槍前端易污染部位,清潔干凈后用潔凈水再擦拭一遍;
3、將離心管架、擴(kuò)增管架、擴(kuò)增管架底板、吸嘴盒及其他相關(guān)物品用有效氯含量為 500mg/L 的消毒水浸泡 2 小時(shí)后,用清水沖洗干凈晾干后使用;
4、對(duì)污染區(qū)域內(nèi)的設(shè)備如擴(kuò)增儀、全自動(dòng)提取儀等,使用核酸氣溶膠污染清除劑進(jìn)行反復(fù)處理;對(duì)生物安全柜等含有空氣過濾系統(tǒng)的設(shè)備,需更換過濾網(wǎng);
5、用有效氯含量為 500mg/L 的消毒液對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)室(地板、墻面、天花板、門、窗戶等地方)進(jìn)行清潔,并且用用有效氯含量為 1000mg/L 的消毒水對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行噴霧消毒(重點(diǎn)部位為操作區(qū)),有效降解空氣中的氣溶膠與附著在實(shí)驗(yàn)臺(tái)表面的核酸污染;同時(shí)加大通風(fēng)量(內(nèi)循環(huán)無用,盡可能外循環(huán));
6、待污染區(qū)域及設(shè)備器件清理完成后,常用設(shè)備和操作臺(tái)面使用移動(dòng)紫外消毒車近距離輻照1小時(shí);實(shí)驗(yàn)室內(nèi)則使用室內(nèi)紫外燈整晚輻照。
步驟1- 6 必須堅(jiān)持每天進(jìn)行,確保消除實(shí)驗(yàn)室污染;
污染消除判斷標(biāo)準(zhǔn)
設(shè)計(jì)陰性對(duì)照組,根據(jù)陰性對(duì)照確認(rèn)污染情況。可使用敞開后隔夜放置操作區(qū)的陰性對(duì)照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)(在單獨(dú)的實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證),若連續(xù)三天陰性對(duì)照沒有起跳,則說明污染得到控制,可恢復(fù)正常實(shí)驗(yàn)。
郵政編碼:200052 電話:021-63800152 傳真:021-63800151 京ICP備15010734號(hào)-10 技術(shù):網(wǎng)至普網(wǎng)站建設(shè)