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正確理解溯源性是第一位的大事
13年前，我被羅氏公司邀請介紹臨床實驗室患者樣品檢測結(jié)果的溯源性。也感謝羅氏公司邀請我，將ISO17511的文件翻譯為我國的國家標(biāo)準。這個標(biāo)準的審核專家委員會主任是潘柏申教授。
如何正確理解溯源性？這個問題有點復(fù)雜。但是，很多實驗室都認為溯源性就是校準品控制品的定值需要溯源性。錯了！是羅氏產(chǎn)品具有溯源性嗎？已經(jīng)錯了！大家被ISO 17511第一版標(biāo)準文件題目迷惑了！因為題目是“校準品和控制品賦值的溯源性”。所以，被國內(nèi)許多臨床實驗室和體外診斷廠商模糊地認為，只要校準品有溯源性，那么試劑盒就有了溯源性！還有，單單一個試劑的說明書上就注明了：本產(chǎn)品具有溯源性！錯了。那么究竟怎么說？
完成一個樣品的檢測，今天必須要有：儀器、試劑、校準品、和操作程序的組合形成的檢測系統(tǒng)。因此，使用完整的檢測系統(tǒng)是確保檢測質(zhì)量的頭等大事。任何實驗室有了你們的儀器硬件，如果不用羅氏配套的試劑、校準品和操作程序，使用任何外來產(chǎn)品開展檢驗，得到的患者檢測結(jié)果已經(jīng)喪失了具有羅氏系統(tǒng)溯源性的優(yōu)勢！因為，溯源性只能在完整的檢測系統(tǒng)系統(tǒng)下，檢測的患者樣品結(jié)果，才具有量值的溯源性！千萬千萬牢記！
再讀ISO 17511-對臨床檢驗結(jié)果溯源性的再次認識
一、ISO 17511標(biāo)題就指出了：要求溯源性的一定是定量的、并具有SI制單位的檢測結(jié)果。
生物樣品中量的測量校準品和控制品賦值的計量溯源性。它首先指的是：對生物樣品（即人的樣品）的定量測量。因此，非定量檢驗沒有溯源性。諸如血液學(xué)中細胞個數(shù)、或蛋白電泳分析的相對量（%）等，沒有要求溯源性。因此，使用IFCC的HbA1c的SI制單位表示糖化血紅蛋白量值的（mmol/mol），是符合ISO 17511的要求。也在這個意義上，全世界被NGSP推廣普遍采用的%，確實不符合SI制要求�？墒�，習(xí)慣的事改也難啊！由于NGSP和IFCC使用了大量新鮮全血標(biāo)本，進行了每年的比較，由此建立了IFCC單位mmol/mol和NGSP的%值間的數(shù)量關(guān)系。美國認可IFCC為國際HbA1c的一級參考方法，自己的NGSP是可溯源至IFCC的二級方法。因此將NGSP的%結(jié)果與IFCC聯(lián)系起來，也具有了可溯源至IFCC的mmol/mol的量值，建立了溯源性。 二、什么是臨床檢驗溯源性的根本目的？
務(wù)必要認識的是：具有溯源性的檢測結(jié)果，必須首先具有良好的精密度！一定牢記：臨床實驗室對任何樣品的檢測手段，是對每個樣品的每個檢測的項目，都只做一次就發(fā)出報告的！因此，臨床實驗室做好檢驗的第一個任務(wù)是一定要控制不精密度！沒有良好的精密度，溯源性再強烈的產(chǎn)品，也做不出一個真實具有溯源性的準確（精密和正確）結(jié)果！
臨床檢驗溯源性的根本目的：患者新鮮樣品的檢驗結(jié)果具有溯源性是ISO17511的主線。說明校準品的可追溯性是為實驗室每天標(biāo)本的檢驗結(jié)果的可追溯性服務(wù)的。單純追求校準品或控制品的可追溯性沒有意義。
三、什么是溯源性？
ISO 17511標(biāo)準不適用于：c) 在相同的計量水平下，測量相同量的兩個測量程序的測量結(jié)果具相關(guān)性，但是這樣的“水平”相關(guān)不提供計量可追溯性。
何為溯源？溯源之溯，乃逆流而上�！端�(jīng)注·江水》：“沿溯阻絕�！币隇樽非蟾�。如：追本溯源；不溯既往。[引自“辭�！盷。因此，臨床實驗室的常規(guī)實驗室間的比對，屬于相等等級的比對，沒有溯源性。若常規(guī)實驗室的檢測系統(tǒng)與參考實驗室的參考系統(tǒng)，對同批患者標(biāo)本的比對，實現(xiàn)了可比性時，實驗室有強烈的證據(jù)說明：他們常規(guī)系統(tǒng)對患者標(biāo)本的檢測結(jié)果的可靠性可以向上溯源到參考系統(tǒng)。實現(xiàn)了溯源性。
證明公司檢測系統(tǒng)中的校準品真的具有溯源性。需要出示溯源性證書。實驗室需要注意該證書的有效期。
如：羅氏cobas c 501/502 NGSP溯源性證書
注意，所有產(chǎn)品的溯源性證書，均注明是什么公司的什么儀器和試劑的；使用了什么校準品。并且一定注明有效期。
上述對溯源性的定義和解釋，說明由上一級的參考系列，與常規(guī)實驗室使用的檢測系統(tǒng)，對一組新鮮患者樣品，通過檢測相同的分析物；經(jīng)方法學(xué)比較的數(shù)據(jù)統(tǒng)計，說明，常規(guī)檢測系統(tǒng)對患者樣品的檢測結(jié)果，與參考體系對相同組患者樣品的檢測結(jié)果，若在量值上具有強烈的可比性！由此實現(xiàn)了參考系列與常規(guī)檢測系統(tǒng)的一條比較鏈。
溯源了什么？
3、方法學(xué)比較時使用的患者樣品，都是經(jīng)過嚴格挑選的。按照美國CLSI的EP9文件，將會對比對方法的任何一個或二者，產(chǎn)生干擾作用的樣品全部剔除！也即，比對是在最佳條件下實施的。
因此，千萬不要認為，有了溯源性，該公司的產(chǎn)品，從量值定義、到檢測原理、以及檢測的可靠性，完全與參考方法、或以參考物質(zhì)校準的參考系統(tǒng)一樣！大錯特錯！
以下，我將以具體示例說明。
四、羅氏HbA1c是如何實現(xiàn)患者新鮮全血樣品檢測結(jié)果的溯源性
在2000年前后，IFCC公布了檢測新鮮全血HbA1c的一級參考方法和一級參考物質(zhì)。
為什么IFCC專家對HbA的β鏈N-端，無論是否被糖化的絕對[HbA1C]和定義未被糖化的絕對[HbA0]，是被酶切下的六肽？
由于IFCC工作組充分考慮到，Hb變異體在蛋白結(jié)構(gòu)上的突變多發(fā)生于HbA的β鏈N-端起，計算的第六個氨基酸位置：
什么是HbA0？
在HbA0制備的整個過程中，IFCC專家確實是做到了：不僅在β鏈的N-端纈氨酸沒有被糖化，連任何β鏈上具有賴氨酸上的ε的-NH2被糖化的，均被清除干凈，真正成為非糖化的HbA的β鏈。
IFCC對HbA1c的檢測，使用的參考物質(zhì)就是上述符合IFCC定義的HbA1c和HbA0。IFCC參考方法以這樣的參考物質(zhì)校準后，使患者新鮮全血檢測的HbA1c，完全符合IFCC的嚴格定義。問題是，按照IFCC的參考方法檢測原理和操作程序，根本無法在常規(guī)中實現(xiàn)。
常規(guī)HbA1C的檢測方法
以羅氏為代表的免疫方法為例。第一個遭遇的問題是：計算HbA1C需要總的血紅蛋白量。在IFCC中，它只使用了未被糖化的HbA的β鏈，加上被糖化的HbA1C（即被糖化的HbA的β鏈N-端纈氨酸糖基化產(chǎn)物）。其他的均不計在內(nèi)。這樣的做法，無法在常規(guī)使用！因此，在常規(guī)檢測方法中，還是采用了被IFCC參考方法定義否認的總血紅蛋白，即以三價鐵的血紅蛋白紅色，進行比色檢測。
這樣，常規(guī)檢測HbA1C的分母，不是IFCC確定的Hb的β鏈的，糖化和非糖化的總量；而是樣品中所有各類血紅蛋白的總和。帶來的問題是，計算的HbA1C的分母部分被放大，如果分子部分檢測的HbA1C完全符合IFCC定義的話，勢必造成最后檢測結(jié)果偏低。這也正是形成免疫檢測方法早期遭遇的問題。被解釋為免疫方法有干擾了。
在最早形成免疫方法時，是設(shè)計制備了抗8~10肽的抗體。由于上述的原因，免疫方法發(fā)現(xiàn)，如果將檢測糖基化的血紅蛋白抗體縮短為檢測N-端纈氨酸起的4肽，檢測結(jié)果與三價鐵離子的比色總血紅蛋白配合，可以對患者樣品檢測結(jié)果，與IFCC參考方法的結(jié)果具有強烈的可比性。使用IFCC提供的具有IFCC HbA1C參考值的新鮮全血，羅氏為它的HbA1C免疫系統(tǒng)，建立的公司一級校準品；并由此逐級傳遞，最后形成了羅氏公司的HbA1C校準品。
但是，深入思考后，你會發(fā)現(xiàn)：溯源性的比較數(shù)據(jù)的完美，并不說明常規(guī)檢測方法的完美。 由于檢測總血紅蛋白的局限性，迫使免疫方法檢測抗體縮短了抗N-端多肽的真實檢測的氨基酸個數(shù)。實際檢測的包括了第六個氨基酸因變異體突變的各類變異體的糖化血紅蛋白，包含了非β鏈的、只要是N-端為纈氨酸被糖化的所有糖化血紅蛋白。因此，與IFCC定義已經(jīng)偏離。
總結(jié)
在近15年的時間里，在臨床實驗室領(lǐng)域中，追求溯源性成了一個時髦事情。似乎什么都需要溯源性！ 一時間，只要有溯源性的，幾乎與檢測結(jié)果可靠性劃上了等號！ 非�；奶频氖�，國內(nèi)廠商的一些產(chǎn)品根本沒有能力去實現(xiàn)真正的溯源性，直接以國內(nèi)可以買到的大公司產(chǎn)品為溯源目標(biāo)，整個溯源過程非常不規(guī)范，令人擔(dān)憂！
這個示例告訴我們，其實追求的溯源，是為了每天新鮮樣品檢測結(jié)果可靠性，是這些檢測結(jié)果，如果國際上已經(jīng)具有了認可參考物質(zhì)或參考方法的話，那么臨床實驗室就盡可能去選擇已經(jīng)具有可溯源至參考系統(tǒng)的產(chǎn)品，用于每天的檢測。實現(xiàn)溯源，只是在患者樣品檢測結(jié)果在量值上可以與參考系統(tǒng)的檢測結(jié)果，具有強烈可比性。
實現(xiàn)溯源性的產(chǎn)品，根本不是在檢測原理、檢測程序上，與參考方法一致。即使有了溯源性的基礎(chǔ)，還必須要認真做好每天的質(zhì)量控制。沒有良好的精密度，即使有了溯源性，檢測結(jié)果依然不準確。期望通過這樣的交流，能夠給大家對溯源性有更深刻的認識！
溯源性還有的重要內(nèi)容
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